agar sulfit de bismut este un mediu de cultură solid, selectiv și diferențial, special formulat pentru izolarea Salmonella enterica subgrup enterica serotip Typhi, printre alte specii de Salmonella. Mediul este cunoscut sub numele de agar BSA pentru acronimul său în engleză Bismuth Sulfite Agar..
Formula originală pentru agar sulfit de bismut a fost creată în 1927 de Wilson și Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); Acesta conținea sulfit de sodiu, glucoză, soluție de bismut, citrat de amoniu, sulfat feros și agar-agar..
Astăzi există o modificare a mediului original, compus din extract de carne, peptonuri de carne și cazeină, indicator de sulfit de bismut, glucoză, fosfat disodic, sulfat feros, verde strălucitor și agar-agar..
Există multe mijloace pentru izolarea speciilor de Salmonella, dar atunci când vine vorba de recuperarea serotipului Typhi, agar sulfitul de bismut are un avantaj notabil asupra lor, deoarece în majoritatea se obține o recuperare foarte mică sau deloc a acestui microorganism..
Cu toate acestea, este necesar să se utilizeze mai multe tipuri de mediu atunci când se încearcă izolarea enteropatogenilor, deoarece agarul cu sulfit de bismut este mai puțin eficient pentru alte specii de Salmonella și pentru genul Shigella, care sunt inhibate sau se dezvoltă foarte slab..
Trebuie remarcat faptul că dintre toate speciile de Salmonella, serotipul Typhi este unul dintre cei mai importanți enteropatogeni la om, acesta fiind singurul său rezervor. Acest serovar provoacă febră tifoidă, gastroenterită, bacteremie și septicemie..
Din acest motiv, este relevant să se includă acest agar atunci când se analizează probe de apă, fecale sau alimente acolo unde se suspectează prezența sa..
Indice articol
La fel ca majoritatea mediilor de cultură, Bismuth Sulfite Agar conține substanțe nutritive pentru a promova creșterea bacteriilor, cum ar fi peptonele și extractul de carne. La fel, glucoza funcționează ca o sursă de energie și carbon..
Cu toate acestea, nu toate bacteriile vor crește pe acest mediu, deoarece Agarul de sulfit de bismut este un mediu selectiv. Conține compuși care inhibă creșterea microorganismelor Gram pozitive și a anumitor bacterii Gram negative. Acești compuși sunt: indicatorul sulfit de bismut și verde strălucitor.
La rândul său, fosfatul disodic menține osmolaritatea și pH-ul mediului.
În plus, agar sulfitul de bismut este un mediu diferențial datorită prezenței sulfatului feros, care arată formarea de HDouăS. HDouăS format de bacterii reacționează cu sulfatul feros și formează un precipitat negru insolubil clar vizibil.
În cele din urmă, agar-agar oferă consistență solidă mediului..
Se cântăresc 52,3 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă. Încălziți amestecul la fiert timp de 1 minut, amestecând frecvent, până se dizolvă complet. Nu supraîncălziți prea mult. Acest mediu nu este autoclavizat deoarece căldura extremă dăunează mediului de cultură..
Se lasă să se răcească la 45 ° C și se agită înainte de servire în vase Petri sterile. Se recomandă realizarea plăcilor cu grosime bună. Pentru aceasta, 25 ml trebuie turnate în fiecare farfurie. Să se solidifice. Deoarece este un mediu care nu este sterilizat, este normal să fie sugerată utilizarea imediată a acestuia.
Cu toate acestea, un studiu realizat de D'aoust în 1977, a arătat că există o recuperare mai bună a Salmonella typhimurium Da Salmonella enteritidis pe măsură ce Bismuth Sulfite Agar este de vârstă medie, performanța pentru serovari nu este afectată Typhi Da Paratyphi B.
D'aoust recomandă utilizarea plăcilor în ziua 4 de refrigerare, deși avertizează că, pe măsură ce vârsta medie, selectivitatea scade, dezvoltând mai ușor tulpini de Proteus vulgaris.
Din acest motiv, pentru probele foarte contaminate, cum ar fi fecalele, este preferabil să se utilizeze mediul proaspăt preparat. În caz contrar, utilizați-o în ziua 4 de preparare. Alți autori recomandă utilizarea plăcilor a doua zi după prepararea lor, depozitate la frigider..
Plăcile răcite trebuie temperate înainte de utilizare. PH-ul mediului trebuie să fie de 7,5 ± 0,2. Culoarea mediului brut este bej, iar mediul pregătit este opalescent cenușiu-verzui.
Printre probele care pot fi plantate în acest mediu se numără probe de fecale, apă potabilă sau ape uzate și alimente..
Pentru îmbunătățirea izolatelor, se recomandă efectuarea unui tratament de pre-îmbogățire cu bulion de lactoză și după îmbogățire cu bulion de tetrationat sau bulion de selenită de cistină, înainte de semănat pe agar sulfit de bismut..
Plăcile sunt incubate la 35 ° C ± 0,2 timp de 24 până la 48 de ore, în aerobioză.
Coloniile din Salmonella Typhi sunt de obicei văzuți pe acest agar în decurs de 24 de ore cu un centru negru și înconjurat de un halou verde strălucitor. În timp ce, în 48 de ore devin complet negre datorită formării de sulfură de hidrogen.
Salmonella Paratyphi A prezintă colonii cu caracteristici variabile. După 18 ore de incubație, se pot observa colonii negre, verzi sau transparente cu aspect mucoid. În timp ce, la 48 de ore, sunt complet negre și uneori cu o strălucire metalică pronunțată..
S. Paratyphi A tinde să înnegrească mediul din jurul coloniei.
Salmonella sp prezintă colonii negre sau cenușii verzui, cu sau fără luciu metalic, și pot înnegri mediul înconjurător sau nu.
Tulpinile coliforme sunt, în general, total inhibate, dar dacă cresc, se dezvoltă sub formă de colonii verzi sau maro opace, fără luciu metalic. Nu patați mediul în jurul coloniei.
-Inoculurile foarte slabe pot provoca colonii de Salmonella Typhi de culoare verde deschis, trecând neobservată și cultura fiind raportată ca fiind negativă.
- Agarul de sulfit de bismut poate inhiba recuperarea unor specii de Salmonella, cum ar fi S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.
-Acest mediu inhibă majoritatea speciilor din genul Shigella.
- S. Typhi și S. arizonae poate da colonii foarte asemănătoare.
-Coliformele care produc HDouăS precum Proteus și Citrobacter produc colonii similare cu cele ale Salmonella, prin urmare este necesar să se efectueze teste de identificare biochimică.
-Pentru a obține colonii izolate trebuie să se facă o striație bună; este singura modalitate de a observa caracteristicile tipice ale coloniilor din genul Salmonella.
Pentru controlul sterilității, o placă neinoculată este incubată la 37 ° C, este de așteptat să nu existe creștere sau schimbare de culoare..
Pentru controlul calității, tulpini cunoscute precum:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
E de asteptat Escherichia coli Da Shigella flexneri sunt parțial inhibate de dezvoltarea coloniilor maro-verzuie și respectiv maronii. În timp ce ambele salmonele trebuie să aibă o dezvoltare excelentă cu colonii negre cu un luciu metalic și, în cele din urmă Enterococcus faecalis trebuie să fie total inhibat.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.