număr agar standard Este un mediu de cultură solid, neselectiv, conceput pentru cuantificarea încărcăturii microbiene aerobe prezente în probe de apă potabilă, ape uzate, băuturi lactate, printre alte alimente. Acest mediu este, de asemenea, cunoscut sub numele de agar PCA, pentru acronimul său în engleză Plate Count Agar. A fost creată în 1953 de Buchbinder, Baris și Goldstein.
Mediul agar de numărare standard este compus din extract de drojdie, tripteină, glucoză, agar și apă distilată. Această formulare conține elemente nutriționale de bază care permit dezvoltarea încărcării microbiene aerobice actuale, care nu este solicitantă.
Deoarece mediul nu conține inhibitori, bacteriile pot crește fără restricții, făcându-l ideal pentru numărarea generală a coloniilor. Cu toate acestea, tehnica de cuantificare a plăcilor nu va detecta toate bacteriile prezente, ci doar pe cele care sunt capabile să crească în condițiile de mediu la care este supus agarul de numărare standard..
În acest sens, tehnica de cuantificare a plăcilor urmărește, în general, să determine cantitatea de bacterii de tip mezofil aerob, adică cele care se dezvoltă la temperaturi cuprinse între 25 și 40 ° C, cu o temperatură optimă de creștere de 37 ° C..
Această grupă bacteriană este foarte importantă, deoarece majoritatea bacteriilor patogene pentru om se găsesc acolo..
Trebuie remarcat faptul că uneori poate fi de interes cuantificarea cantității de bacterii psihrofile prezente în alimente. Aceste bacterii sunt cele care se dezvoltă la temperaturi scăzute (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.
De asemenea, bacteriile termofile, care se dezvoltă între 50 ° C și 80 ° C sau mai mult, pot fi importante în anumite tipuri de alimente, cum ar fi conservele..
Cuantificarea microbiană este exprimată în unități care formează colonii (CFU) per gram sau mililitru de probă.
Indice articol
Mediul de numărare standard este conceput pentru a permite creșterea cu succes a bacteriilor aerobe nerezolvante, deoarece extractul de drojdie, tripteina și glucoza furnizează nutrienții necesari pentru o bună creștere microbiană..
Pe de altă parte, mediul are o culoare deschisă și un aspect transparent, motiv pentru care este ideal pentru vizualizarea coloniilor dezvoltate prin metoda de însămânțare profundă (turnarea plăcilor)..
Numărarea coloniilor prin metoda de însămânțare a suprafeței spatulei Drigalski este de asemenea posibilă..
Atunci când încărcătura microbiană este mare, trebuie făcute diluții zecimale ale eșantionului studiat pentru a putea număra UFC.
Trebuie remarcat faptul că acest mediu este recomandat de American Public Health Association (APHA) pentru numărul de mezofili aerobi..
Se cântăresc 23,5 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Pentru a se dizolva complet, amestecul trebuie încălzit amestecând frecvent până fierbe. Etapele următoare depind de tehnica de însămânțare care trebuie utilizată.
Distribuiți distribuind 12-15 ml în eprubete. Ulterior, sterilizați într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute. Permiteți solidificarea verticală sub forma unui bloc. A se păstra la frigider până la utilizare.
Topiți ștecherul când îl veți folosi. Odată topit, păstrați-l într-o baie de apă la 44-47 ° C în timp ce probele sunt pregătite..
Sterilizați mediul într-o autoclavă la 121 ° C și apoi distribuiți 20 ml în cutii Petri sterile. Se lasă să se solidifice, să se inverseze și să se păstreze în frigider până la utilizare.
Temperează plăcile înainte de utilizare. PH-ul mediului trebuie să fie de 7,0 ± 0,2.
Agarul de numărare standard este utilizat în tehnica de numărare a mezofilelor aerobe în timpul analizei microbiologice a apei și a alimentelor. Numărul mezofililor aerobi este necesar, deoarece determină calitatea sanitară a probei studiate..
Aplicarea acestei tehnici (folosind acest mediu) permite vizualizarea macroscopică a coloniilor izolate pentru cuantificarea acestora..
Tehnica constă în următoarele:
1) Omogenizați proba pentru a redistribui bacteriile prezente.
2) O suspensie inițială se face într-o sticlă sau pungă sterilă, respectând raportul de 10 gr sau 10 ml de probă în 90 ml de diluant (10-1).
3) Din suspensia inițială, diluțiile zecimale pertinente se fac în funcție de tipul probei. Ex: (10-Două, 10-3, 10-4). Diluțiile se fac cu apă peptonică sau tampon fosfat..
Pentru a face acest lucru, luați 1 ml din suspensia inițială și puneți-l în 9 ml de diluant, continuați diluțiile dacă este necesar, luând acum 1 ml din diluția 10-Două și așa mai departe.
4) Se iau 1 ml din fiecare diluție și se pune în cutii Petri sterile goale.
5) Adăugați la fiecare placă 12 până la 15 ml de agar de numărare standard topit anterior și așezat la 44 - 47 ° C.
6) Rotiți ușor plăcile pentru a distribui proba de-a lungul agarului uniform și lăsați-l să se solidifice..
7) Inversați plăcile și incubați la 37 ° C în aerobioză timp de 24 până la 48 de ore.
8) La sfârșitul timpului, plăcile sunt examinate și coloniile sunt numărate în diluția care o permite. Acele plăci care au între 30 și 300 CFU sunt alese pentru numărare.
Numărarea se poate face manual sau puteți utiliza echipamentul de numărare a coloniilor.
Valorile admise pe ml de probă pot varia de la o țară la alta, în funcție de reglementările prin care sunt reglementate..
Calculul general se face folosind următoarea formulă:
Exprimați rezultatele în 1 sau 2 cifre, înmulțind cu baza corespunzătoare 10. Exemplu: dacă rezultatul este 16.545, acesta este rotunjit pe baza celei de-a treia cifre la 17.000 și va fi exprimat după cum urmează: 1,7 x 104. Acum, dacă rezultatul ar fi 16.436, rotunjiți-l la 16.000 și exprimați 1,6 x 104.
-Se inoculează cu 0,1 ml de probă directă dacă este lichidă, suspensie inițială 10-1 sau 10 diluții consecutive-Două, 10-3 etc, în centrul unei plăci de agar standard.
-Distribuiți proba uniform cu o spatulă Drigalski sau o tijă de sticlă în formă de L. Lăsați să stea timp de 10 minute.
-Inversați plăcile și incubați aerob la 37 ° C timp de 24 până la 48 de ore.
-Continuați să numărați coloniile, alegeți acele plăci care se află între 20 și 250 CFU.
Pentru calcul, se aplică factorul de diluare, care este inversul. Numărul este rotunjit la 2 cifre semnificative (rotunjire conform celei de-a treia cifre) și exprimat în puterea bazei 10. De exemplu, dacă 224 UFC sunt numărate în eșantion fără diluare (10-1), Este raportat 22 x 101 UFC, dar dacă cifra ar fi 225, se raportează 23 x 101 UFC.
Acum, dacă numărați 199 CFU în diluția 10-3, va fi raportat 20 x 104 CFU, dar dacă 153 CFU sunt numărate în aceeași diluție, se va raporta 15 x 104 UFC.
Mediul de cultură de numărare standard poate fi evaluat folosind tulpini cunoscute certificate, cum ar fi: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Stafilococ epidermid ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.
Dacă mediul de cultură este în condiții optime, se așteaptă o creștere satisfăcătoare în toate cazurile, cu excepția L. fermentum care poate avea o performanță regulată.
Pentru a evalua sterilitatea mediului de cultură, una sau două plăci din fiecare lot preparat (fără inoculare) trebuie incubate la 37 ° C în aerobioză timp de 24 de ore. După acest timp, nu trebuie observată nicio creștere sau schimbare de culoare a mediului..
-Nu topiți agarul de mai multe ori.
-Mediul preparat poate dura până la 3 luni atâta timp cât este păstrat la frigider și ferit de lumină..
-Acest mediu nu este potrivit pentru microorganisme fastidioase sau anaerobe.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.