Fundație, preparare și utilizări ale agarului nutritiv

985
Sherman Hoover

agar nutritiv Este un mediu solid de cultură neselectiv și nediferențial. În acest mediu cresc tot felul de bacterii care nu sunt solicitante din punct de vedere nutrițional..

Este un mediu simplu și, în ciuda numelui său, conține o valoare nutrițională mai mică în comparație cu alte medii similare, cum ar fi Agar Brain Heart Infusion sau Agar de soia Trypticase..

Numărul de colonii pe agar nutrienți

Utilitatea sa în laborator este foarte variată. Utilizat în principal pentru subcultura speciilor, întreținerea tulpinilor, numărarea coloniilor, ca bază pentru prepararea agarului de sânge, printre altele..

De asemenea, datorită culorii sale bej deschis, producția de pigmenți generați de unele tulpini bacteriene, cum ar fi pigmentul verzui al Pseudomonas aeruginosa, pigmentul roșu cărămidă produs de Serratia marcescens la temperatura camerei, pigmentul galben auriu al Staphylococcus aureus, printre alții.

În plus, este unul dintre cele mai ieftine suporturi în creștere găsite pe piață..

Indice articol

  • 1 Justificare
  • 2 Compoziție
  • 3 Pregătirea
  • 4 utilizări
    • 4.1 Ca bază pentru prepararea agarului de sânge
    • 4.2 Stimulați sporularea bacteriilor care formează spori
    • 4.3 Întreținerea tulpinilor
    • 4.4 Numărul de colonii
    • 4.5 Rularea testelor de diagnostic
    • 4.6 Recuperarea aerobilor mezofili din apele sărate de agrement (plaje)
  • 5 Referințe

Bază

După cum sa menționat mai sus, este un mediu foarte simplu, care se bazează pe furnizarea de nutrienți pentru creșterea bacteriană fără restricții și fără reacții complexe de interpretat..

Deoarece mediul este translucid, este ideal pentru numărarea coloniilor prin metoda de însămânțare în adâncime..

Compoziţie

Este compus în principal din extract de carne sau extract de drojdie, peptonuri sau gelatină digestivă pancreatică, agar-agar, clorură de sodiu și apă distilată..

Extractul de carne sau drojdie și peptonele reprezintă sursele esențiale de carbon și minerale (azot, fosfor și sulf), care vor fi utilizate de bacterii ca sursă de energie și factori de creștere..

La fel, agar-agar este baza tuturor mediilor de cultură solide, venind să înlocuiască gelatina, care a fost primul compus de bază folosit de Robert Koch pentru a da consistență solidă mediului său..

Agar este o polizaharidă compusă din galactoză, galactomanan, agaroză și agaropectină. Se stabilește la 40 ° C și se topește aproape de 100 ° C.

La rândul său, clorura de sodiu asigură mediului osmolaritatea necesară dezvoltării bacteriene.

În cele din urmă, apa servește la hidratarea și dizolvarea compușilor liofilizați. Trebuie folosită apă distilată ajustată la pH neutru. Apa de la robinet nu trebuie utilizată deoarece conține calciu și magneziu care pot reacționa cu fosfați în mediu și pot forma săruri insolubile..

Pregătirea

Pentru un litru de agar nutritiv, trebuie cântărite 31 g de mediu deshidratat. Se introduce într-un balon și se dizolvă într-un litru de apă distilată. După 5 minute de stat, încălziți pe o sursă de căldură și amestecați constant până la fierbere timp de 1 sau 2 minute..

Pregătirea mediului de cultură.

Balonul este apoi plasat într-o autoclavă și sterilizat la 121 ° C timp de 20 de minute..

Sterilizarea în autoclavă

La sfârșitul timpului, este scos din autoclavă și servit în cutii Petri sterile, folosind o hota cu flux laminar sau arzătorul Bunsen..

Dacă vasele Petri sunt de unică folosință (plastic), mediul trebuie distribuit atunci când agarul are o temperatură de aproximativ 50 ° C, pentru a preveni deformarea lor de căldură excesivă.

Se lasă să se solidifice și să se depoziteze pe un suport de placă inversat și să se păstreze la frigider la 2-8 ° C până la utilizare.

Plăcile trebuie temperate înainte de a fi însămânțate. Plăcile cu agar nutritiv nu trebuie utilizate dacă sunt contaminate sau deshidratate.

PH-ul mediului preparat trebuie ajustat la 7,3 ± 0,2.

Aplicații

Este cel mai simplu mediu de cultură utilizat în laboratorul de microbiologie. Formularea sa este excelentă pentru creșterea bacteriilor neexigente.

Principalele sale utilizări sunt explicate mai jos:

Ca bază pentru prepararea agarului de sânge

Acest mediu este uneori folosit ca bază pentru prepararea agarului de sânge, totuși nu este cea mai frecvent utilizată bază..

Stimulați sporularea bacteriilor care formează spori

Acest mediu de cultură este util în special pentru stimularea sporulării bacteriilor care formează spori, cum ar fi Bacillus sp.

Pentru a face acest lucru, o tulpină a genului Bacil și incubat timp de 24 de ore la 37 ° C în aerobioză. Odată ce coloniile au crescut, placa este supusă stresului de temperatură, adică temperatura cuptorului este crescută la 44 ° C și lăsată încă 24 de ore sau plasată la frigider pentru 24 de ore.

La sfârșitul timpului, frotiurile culturii sunt făcute și colorate cu colorare Gram sau cu colorare de spori Shaeffer-Fulton. La aceștia se vor observa bacilii cu endospori (spori din interiorul bacilului) și exosporii (sporii din afara bacilului)..

Întreținerea tulpinii

Unele laboratoare de cercetare sau laboratoare universitare de sprijin didactic necesită menținerea bacteriilor viabile de importanță clinică cât mai mult timp posibil, pentru a utiliza banca de bacterii (bacteriotecă) pentru munca de cercetare sau pentru pregătirea practicilor de predare, unde studenții vor învăța să manipuleze și să identifică aceste microorganisme.

Agar nutrienți, precum și agar de infuzie a inimii creierului, pot fi utilizați în acest scop. Agarul este pregătit, turnat în tuburi cu capac de bakelită și înclinat pe o bază, în așa fel încât agarul să se solidifice formând un bloc în partea de jos și o conică la suprafață (cioc de flaut).

Fiecare tub este etichetat cu numele bacteriilor care vor fi însămânțate și data. Fiecare dintre bacterii va fi însămânțată pe cadru și incubată timp de 24 de ore, odată ce coloniile au crescut, tuburile sunt stocate la temperatura camerei.

Bacterioteca trebuie reînnoită de la 1 la 3 luni, pentru a evita contaminarea și deshidratarea mediului și, de asemenea, moartea bacteriilor.

Doar bacteriile care nu sunt pretențioase pot fi întreținute în acest fel.

Numărul de colonii

Deși există mijloace specializate pentru numărarea coloniilor, cum ar fi agarul de numărare standard, agarul nutritiv poate fi utilizat în acest scop, fie prin însămânțarea de suprafață cu o spatulă drigalski, fie prin adâncime. Din acest motiv, este foarte util în analiza microbiologică a alimentelor și a apei..

Rularea testelor de diagnostic

Deoarece este un mediu care nu conține sânge sau orice alt aditiv, este ideal pentru a lua colonii cultivate pe acest mediu pentru a efectua testul catalazei..

La fel, datorită culorii sale deschise, este indicat să efectueze teste oxidazice direct pe o zonă a agarului însămânțat, fără interferențe..

Recuperarea aerobilor mezofili din apele sărate de agrement (plaje)

Agarul nutritiv preparat cu 10% apă de mare este util pentru evaluarea aerobilor mezofili în apele de plajă..

În acest fel, se poate aprecia nivelul real de contaminare pe care îl au apele cu aceste microorganisme, deoarece în acest tip de probe rezultatele se suprapun atunci când se utilizează medii de cultură preparate în mod convențional..

Acest lucru a fost demonstrat de Cortez și colab. în 2013 într-o lucrare de cercetare.

Acest lucru se poate explica datorită schimbării bruște pe care o suferă bacteriile atunci când trec de la un mediu hipersaltat la un mediu cu conținut scăzut de sare, prin urmare microorganismele intră într-o stare de letargie în care sunt viabile, dar nu cultivabile..

Referințe

  1. „Agar nutritiv”. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 13 Sep 2016, 20:33 UTC. 29 Dec 2018, 21:04 en.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosticul microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana S.A.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. (Ed. A 5-a). Argentina, Editorial Panamericana S.A.
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Efectul mediilor de cultură preparate cu apă de mare asupra indicatorilor de sănătate în apele marine ale stațiunilor balneare din Chichiriviche, statul Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M și Cardoso M. Calitatea microbiologică a apei pentru dozele de inseminare, pentru porcine.Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologie clinică practică. Universitatea din Cadiz, ediția a II-a. Serviciul de publicații UCA.

Nimeni nu a comentat acest articol încă.