agar dextroză de cartofi Este un mediu de cultură nutritiv solid, neselectiv. În ea pot crește specii bacteriene și fungice, dar utilizarea sa este indicată în special pentru izolarea ciupercilor filamentoase și a drojdiilor. Este, de asemenea, cunoscut sub numele de mediu PDA pentru expresia engleză Potato Dextrose Agar.
Este deosebit de util pentru izolarea ciupercilor fitopatogene, adică a celor care afectează plantele. Pentru a semăna probele din legume infectate, pot fi utilizate alte mijloace, cum ar fi Sabouraud agar sau malta-agar, cu toate acestea, pentru utilizarea de rutină, agarul cu dextroză din cartofi este preferat datorită obținerii sporulării mai mari..
Este, de asemenea, utilizat pentru numărarea coloniilor fungice în probe de produse cosmetice, produse farmaceutice și unele alimente lactate. De asemenea, este potrivit pentru însămânțarea probelor de resturi de piele în căutarea dermatofiților, care cresc foarte bine în acest mediu, dezvoltându-și pigmenții caracteristici..
Mediul de dextroză din cartofi este un mediu foarte simplu și ușor de preparat în laborator. Conține, după cum sugerează și numele său, infuzie de cartof, dextroză și agar-agar. În plus, pot fi adăugate substanțe inhibitoare pentru a preveni creșterea bacteriană și pentru a crește selectivitatea pentru speciile fungice..
Indice articol
Agarul cu dextroză din cartofi este un mediu de cultură care furnizează elementele nutriționale necesare dezvoltării ciupercilor și drojdiilor filamentoase..
Combinația dintre infuzia de cartof și glucoză oferă sursa perfectă de energie pentru o creștere satisfăcătoare a ciupercilor. În timp ce agar este cel care asigură consistența mediului.
Mediul în sine nu inhibă creșterea bacteriilor, prin urmare este un mediu neselectiv. Pentru ao face selectiv, are nevoie de adăugarea de substanțe inhibitoare precum acidul tartric sau antibiotice..
Se pregătește după cum urmează:
În primul rând, cartofii se spală foarte bine, îndepărtând solul pe care îl posedă. Se taie felii subțiri cu tot și coajă. 200 g de cartofi se cântăresc și se fierb într-un litru de apă distilată timp de o jumătate de oră.
La sfârșitul timpului, filtrați sau strecurați tot preparatul printr-o pânză de brânză.
Lichidul obținut se completează cu apă distilată de până la un litru. Se adaugă 20 g de agar-agar și 20 g de dextroză la perfuzie, se amestecă bine și se autoclavează la 121 ° C, la 15 kilograme de presiune timp de 15 minute..
Se lasă să se răcească la 50 ° C și se servește în vase Petri sterile. Plăcile pregătite sunt depozitate la frigider..
Se pot prepara și pene de agar cu dextroză..
În acest caz, înainte de sterilizarea în autoclavă, 12 până la 15 ml de mediu sunt plasate în tuburi, ulterior sunt autoclavizate și la plecare se întind pe suporturi speciale până când se solidifică. Se păstrează la frigider.
Mediul rămâne la un pH de 5,6 ± 0,2, cu toate acestea, unele laboratoare adaugă acid tartric 10% pentru a scădea pH-ul la 3,1 ± 0,1 pentru a inhiba creșterea bacteriană..
În același sens, alte laboratoare preferă să adauge antibiotice pentru ao face selectiv pentru cultivarea ciupercilor și pentru a preveni dezvoltarea bacteriilor..
Se cântăresc 39 g de mediu deshidratat disponibil în comerț și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Lasati sa stea 5 minute.
Amestecul este încălzit cu agitare frecventă până la dizolvarea completă. Ulterior, este sterilizat într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute..
Se pot pregăti plăci sau pene. Procedați așa cum este descris mai sus.
PH-ul este de 5,6 ± 0,2. Dacă se dorește pH-ul de 3,1, trebuie adăugate 14 ml de acid tartric steril 20% înainte de servire pe farfurii..
Mediul brut este bej, iar mediul preparat este chihlimbar deschis, cu aspect ușor tulbure sau opalescent..
Frunzele sunt tăiate în bucăți.
Într-un pahar de 50 cmc cu 50% alcool, așezați bucățile de frunze (bucăți colorate și sănătoase), pentru a dezinfecta suprafața timp de 20 până la 30 de secunde. Aruncați alcoolul și adăugați 20% hipoclorit de sodiu timp de 40 până la 50 de secunde dacă sunt frunze subțiri și măriți timpul la 80 de secunde dacă este scoarță și bușteni.
Aruncați hipocloritul de sodiu și luați bucățile dezinfectate cu o pensă sterilă și așezați-le pe suprafața mediului (maximum 10 bucăți). Datați și incubați la 20-30 ° C.
Dacă fructul este cărnos, deschideți fructul afectat de ciupercă și luați bucăți cu un bisturiu steril, atât din părțile bolnave, cât și din cele sănătoase și așezați-le pe suprafața agarului.
Dacă fructul este citric, cum ar fi o lămâie sau o portocală, acesta trebuie deschis și semințele semănate.
Când suprafața fructului este afectată și se observă sporii, idealul este să folosiți metoda de grătare pe farfurie; Aceasta constă în atingerea sporilor cu o spatulă în formă de „L” sterilizată și răcită, și apoi realizarea unei însămânțări în zigzag de 2 până la 3 ori pe agar.
Sunt dezinfectate așa cum este descris în frunze și ulterior așezate pe agar.
Se face o răzuire a scoarței și mai târziu bucăți din partea sănătoasă și bolnavă sunt luate și semănate direct pe agar.
Plăcile însămânțate sunt incubate aerob la 20-30 ° C timp de 72 de ore.
Prelevarea trebuie făcută folosind o lamă de bisturiu nr. 11, fie pentru a tăia părul afectat, solzii pielii sau unghiile în căutarea dermatofiților. Înainte de prelevarea probei, zona trebuie dezinfectată cu 70% alcool..
În leziunile solzoase, marginea leziunii ar trebui să fie răzuită, deoarece ciuperca este mai probabil să fie găsită acolo.
În leziunile exudative, proba se ia cu un tampon uscat sau umed. Semănați imediat pe agar dextroză din cartofi sau pe agar Sabouraud. Evitați mijloacele de transport.
O altă metodă de eșantionare este prin tehnica pătratului covorului Mariat și Adan Campos. În acest caz, zona afectată este frecată de 5 ori cu o bucată de lână sterilă pentru cultivare ulterioară..
Proba poate fi plasată direct în mediul de cultură.
În funcție de patologie, partea afectată poate fi tăiată sau dezrădăcinată. Așezați proba în mediul de cultură.
O parte specifică a unghiei afectate poate fi răzuită sau tăiată. Va depinde de tipul de leziune.
Tăiați proba în bucăți de 1 mm înainte de însămânțare pentru a crește probabilitatea de contact a ciupercii cu mediul de cultură..
Coloniile obținute în placă sunt izolate în tuburi care conțin agar dextroză din cartofi pentru a efectua studiul macroscopic al coloniilor (aspect, culoare, consistență, grad de dezvoltare.
Studiul microscopic (observarea structurilor și formațiunilor acestora) se poate face prin microculturi sau observare directă la microscop între lamă și lamelă..
Acest mediu poate fi, de asemenea, utilizat pentru a determina încărcătura de ciuperci și drojdie prezentă în probe de plante, alimente, cosmetice sau medicamente. În acest scop, se utilizează agar dextroză din cartofi suplimentat cu antibiotice, cum ar fi: (cloramfenicol, clorotetraciclină sau ambele).
Se toarnă 1 ml de probă - de preferință diluat - într-o cutie Petri sterilă și goală, apoi se topește un dop de agar dextroză din cartofi și se lasă să se răcească la 45 ° C. Se toarnă pe vasul Petri și se rotește până se omogenizează. Lăsați să stea până se solidifică.
Se incubează aerob la 20-25 ° C (matrițe) sau 30-32 ° C (drojdii) timp de 5 până la 7 zile sau mai mult, în funcție de tipul de ciupercă căutat și de tipul probei. Două plăci pot fi utilizate pentru a incuba în ambele domenii de temperatură.
Agarul cu dextroză din cartofi poate fi utilizat pentru a menține tulpini viabile de ciuperci timp de câțiva ani.
Pentru a face acest lucru, ciuperca este cultivată în pene de agar dextroză din cartofi și odată ce ciuperca a crescut, este acoperită cu ulei mineral. Uleiul trebuie sterilizat într-o autoclavă timp de 45 de minute și să aibă o vâscozitate de aproximativ 300 până la 330 Saybolt. Uleiul trebuie să fie la 1 până la 2 cm deasupra vârfului teșitului.
Din fiecare lot pregătit, trebuie prelevate 1 sau 2 plăci și incubate la 25 ° C timp de 48 de ore sau la 20 ° C timp de 96 de ore. Un control bun al sterilității este unul în care nu se observă dezvoltarea coloniei..
Tulpini de control cunoscute sau certificate, cum ar fi:
Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Se așteaptă o creștere bună în toate cazurile.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.