Sare și agar de manitol Justificare, preparare și utilizări

1724
Anthony Golden

sare și agar de manitol sau manitolul sărat este un mediu de cultură solid, selectiv și diferențial. A fost creat de Chapman pentru izolarea cocilor patogeni Gram pozitivi, în special Staphylococcus aureus.

Cu toate acestea, este util și pentru izolare Staphylococus epidermidis, care uneori poate fi prezent ca agent patogen oportunist și Staphylococcus saprophyticus, patogen urinar recunoscut, printre alte specii.

A. Fiola cu mediu agar preparat cu manitol sărat. B. Plăci de agar de manitol sărat însămânțate cu tulpini bacteriene de manitol care fermentează și care nu fermentează. Sursa: A și B: Fotografii realizate de autor MSc. Marielsa gil.

Unii Enterococcus sunt capabili să crească pe acest mediu, precum și anumite tije formatoare de spori Gram pozitive..

Acest mediu este foarte util în analiza probelor clinice, dar este utilizat și în studiul microbiologic al produselor alimentare și în controlul calității produselor industriale, cum ar fi produsele cosmetice, medicamentele, printre altele..

Agar de manitol sărat este compus din extracte și peptonuri din carne de vită, tripteină, manitol, clorură de sodiu, roșu fenol și agar.

Indice articol

  • 1 Justificare
  • 2 Pregătirea
  • 3 utilizări
  • 4 Controlul calității
  • 5 Considerații finale
  • 6 Referințe

Bază

Agarul de manitol este selectiv datorită concentrației sale ridicate de sare. Salinitatea acționează ca o substanță inhibitoare și previne dezvoltarea bacteriilor Gram negative.

De asemenea, este diferențial datorită prezenței manitolului glucidic și a indicatorului pH-ului roșu fenol. Din aceasta, bacteriile capabile să fermenteze manitolul produc acizi, acidifianți mediul, transformând coloniile și mediul în galben..

Pe de altă parte, coloniile care nu fermentează manitolul cresc în mediu luând substanțele nutritive furnizate de extracte de carne și peptone și tripteină. De acolo bacteriile extrag carbonul, azotul, vitaminele și mineralele necesare creșterii lor..

În acest caz, coloniile pot fi slabe sau roz puternic, iar mediul rămâne de aceeași culoare sau se schimbă în fucsia.

Agar este substanța care asigură consistența mediului.

Pregătirea

Pentru a prepara un litru de agar de manitol sărat, 111 g de mediu deshidratat de la compania comercială preferată sunt cântărite și dizolvate în 1000 ml de apă distilată, folosind un balon..

Căldura se aplică cu agitarea frecventă a mediului pentru a îmbunătăți procesul de dizolvare. Se fierbe un minut.

Așezați balonul în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.

La sfârșitul timpului, scoateți balonul din autoclavă, lăsați-l să se odihnească și serviți între 15 și 20 ml pe cutii Petri sterile când temperatura este de aproximativ 50 până la 55 ° C..

Se lasă să se solidifice, comandându-se inversat în plaqueros și păstrându-se în frigider până la utilizare. Înainte de a semăna o probă, așteptați ca placa să atingă temperatura camerei.

Plăcile sunt însămânțate prin striat sau prin însămânțarea de suprafață cu o spatulă drigalski. PH-ul final al mediului preparat trebuie să fie de 7,4 ± 0,2

Culoarea mediului deshidratat este bej deschis, iar culoarea mediului preparat este roșu portocaliu.

Aplicații

Datorită selectivității sale ridicate, acest mediu este ideal pentru semănatul probelor cu floră mixtă în care doriți să căutați prezența Staphylococus aureus, ca principal agent patogen al acestui gen.

În acest sens, una dintre cele mai frecvente utilizări este în analiza microbiologică a exsudaților faringieni și a probelor de descărcare nazală, în special pentru a detecta purtători asimptomatici ai S. aureus.

Unele țări au implementat această analiză ca o cerință obligatorie pentru persoanele care doresc să lucreze ca furnizori de alimente..

Acest control previne angajarea transportatorilor de S. aureus, evitându-se astfel otrăvirea alimentară masivă, datorită consumului de alimente contaminate cu enterotoxină stafilococică.

Poate fi inclus și în însămânțarea infecțiilor plăgilor, hemoculturi, LCR, spălături bronhoalveolare, printre altele.

Agarul de manitol sărat este util pentru reizolarea coloniilor din culturi de urină din agar CLED sau agar de sânge al cărui Gram a dezvăluit coci Gram pozitivi în clustere..

Este valabil și în analiza microbiologică a alimentelor, a apei potabile, a solurilor, printre alte aplicații..

QA

După ce a fost pregătit un lot de farfurii cu agar de manitol sărat, este recomandabil să efectuați un control al calității. Tulpinile de control sunt semănate pentru a arăta dacă există sau nu creșterea acestora.

Ca control pozitiv, tulpini cunoscute de Staphylococcus aureus. Ar trebui să crească în mod satisfăcător, dezvoltând colonii galbene, iar mediul, de asemenea, capătă aceeași culoare.

De asemenea, este convenabil să se includă o tulpină cunoscută de Stafilococ epidermid. Ar trebui să crească în mod satisfăcător, dezvoltând colonii roz, iar mediul rămâne de aceeași culoare sau se întunecă până la un roz mai puternic.

Ca un control negativ, se folosesc tulpini care nu ar trebui să crească pe acest mediu. De exemplu, o tulpină cunoscută de Escherichia coli sau Klebsiella pneumoniae. Rezultatul așteptat este inhibarea completă, adică lipsa creșterii..

În plus, o placă neinoculată trebuie incubată. În el nu ar trebui să existe creștere sau schimbare de culoare.

Este important ca placa să nu fie utilizată dacă există semne de deteriorare, precum contaminare, deshidratare, decolorare, printre altele.

Gânduri finale

Atunci când utilizați mediu agar de manitol sărat, există câteva aspecte importante de luat în considerare:

-Obținerea unei creșteri a coloniilor galbene nu indică faptul că este Staphylococcus aureus. Trebuie amintit că unele tulpini de Enterococcus sunt capabile să crească în acest mediu și să fermenteze manitolul, precum și anumite tije formatoare de spori Gram pozitive..

Prin urmare, este important să efectuați un Gram pe colonie și un test de catalază..

-Pe de altă parte, trebuie considerat că alte specii de Staphylococcus, altele decât aureus sunt, de asemenea, capabili să fermenteze manitolul. Prin urmare, este important să subculturați colonia într-un bulion de nutrienți pentru a lua de acolo și a efectua testul coagulazei..

Printre speciile Staphylococcus de importanță clinică pentru om care fermentează manitolul sunt: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, printre alții.

Alții pot da o reacție variabilă, adică uneori pozitivă și alteori negativă. Unii sunt S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, printre altele.

-Nu este recomandat să luați colonii direct din agar de manitol pentru a efectua testul coagulazei, deoarece concentrația mare de sare a mediului poate interfera cu rezultatul..

-În cele din urmă, se recomandă incubarea plăcilor însămânțate cu manitol sărat până la 48 de ore, deoarece unele tulpini de S. aureus poate fermenta încet manitolul, deși acest lucru este rar.

Referințe

  1. Laboratoarele Britannia. Agar de manitol sărat. 2015. Disponibil la: britanialab.com
  2. "Agar de manitol sărat". Wikipedia, enciclopedia gratuită. 31 oct 2018, 19:08 UTC. 17 ianuarie 2019, 20:55, disponibil la: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. (Ed. A 5-a). Argentina, Editorial Panamericana S.A.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosticul microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana S.A
  5. Laboratoarele BD. BD Agar de sare manitol. 2013. Disponibil la: bd.com.

Nimeni nu a comentat acest articol încă.