Agar XLD sau Agar deoxicolat de lizină de xiloză este un mediu de cultură solid selectiv și diferențial pentru izolarea enteropatogenilor. Taylor a conceput formula de agar XL (xiloză, lizină) pentru a îmbunătăți izolarea genului Shigella.
El a observat că acest gen a fost inhibat în majoritatea mediilor destinate izolării enteropatogenilor. Ulterior, s-au adăugat deoxicolat de sodiu, tiosulfat de sodiu și citrat de amoniu feric pentru a crește selectivitatea acestuia. Această formulă sa dovedit a fi utilă atât pentru izolarea Shigella, cât și pentru Salmonella.
Agarul XLD este compus din extract de drojdie, deoxicolat de sodiu, xiloză, lizină, lactoză, zaharoză, tiosulfat de sodiu, citrat feric de amoniu, clorură de sodiu, fenol roșu și agar. În majoritatea laboratoarelor de bacteriologie, agarul duo XLD și agar SS sunt utilizate pentru a studia probe de fecale pentru Shigella și Salmonella..
Alte laboratoare preferă combinația de CHROMagar Salmonella și agar XLD, printre alte opțiuni disponibile. Aceste duouri pot fi preparate în cutii Petri duble. Pe o parte, plasează agar XLD și pe cealaltă parte, celălalt mediu ales.
Indice articol
Agarul XLD are extract de drojdie, care servește ca sursă de nutrienți pentru microorganismele care se dezvoltă pe acest agar. În plus, prezența glucidelor (xiloză, zaharoză și lactoză) oferă energie bacteriilor care le pot fermenta.
Ca substanță inhibitoare, are deoxicolat de sodiu; Acest lucru previne dezvoltarea bacteriilor Gram pozitive, făcând mediul selectiv.
După cum sa menționat deja, agarul XLD conține xiloză; Acest carbohidrat este fermentat de toate bacteriile care cresc în acest mediu, cu excepția genului Shigella..
Aceasta este una dintre caracteristicile care îi conferă caracterul diferențial, deoarece coloniile Shigella se disting de restul prin dezvoltarea coloniilor roșii, în timp ce celelalte bacterii produc colonii galbene.
Genul Salmonella fermentează și xiloză, generând inițial colonii galbene. Cu toate acestea, după epuizarea glucozei xiloză, aceasta atacă lizina pentru enzima sa lizină decarboxilază. Decarboxilarea lizinei generează alcalii care transformă culoarea coloniei și a mediului înconjurător în roșu original.
Acest comportament este realizat numai de Salmonella, deoarece coliformii care decarboxilează lizina nu sunt capabili să alcalinizeze mediul. Acest lucru se datorează faptului că coliformele fermentează și lactoza și zaharoza prezente; prin urmare, producția de acizi este foarte mare, lăsând colonia galbenă în aceste bacterii.
Trebuie remarcat faptul că genul Salmonella nu fermentează zaharoza sau lactoza.
Agar XLD permite, de asemenea, detectarea speciilor de Salmonella care produc HDouăS; Pentru aceasta, are sursa de sulf reprezentată de tiosulfat de sodiu și un dezvoltator de reacție care este citratul feric de amoniu..
Acesta din urmă reacționează cu HDouăS (gaz incolor) și formează un precipitat negru vizibil insolubil de sulfat de fier. În acest sens, caracteristicile coloniilor de salmonella vor fi roșii cu un centru negru..
Trebuie remarcat faptul că pentru reacția de formare a lui HDouăDa, este necesar un pH alcalin. De aceea alte Enterobacteriacee care formează HDouăNu pot face acest lucru sau o fac prost în acest mediu, deoarece aciditatea ridicată pe care o produc atunci când fermentează carbohidrații prezenți inhibă sau împiedică reacția.
În cele din urmă, clorura de sodiu menține echilibrul osmotic; agar este agentul de solidificare, iar roșul fenol detectează modificările pH-ului, transformând culoarea coloniilor și a mediului.
Se cântăresc 55 g mediu XLD deshidratat și se dizolvă în 1 litru de apă. Se încălzește și se amestecă amestecul până ajunge la punctul de fierbere. Nu supraîncălziți, deoarece căldura dăunează mediului și creează un precipitat care modifică morfologia coloniilor tipice.
Acest mediu nu trebuie autoclavizat. La dizolvare, acesta trebuie trecut într-o baie de apă la 50 ° C. La răcire trebuie servit direct pe cutii Petri sterile. Pot fi turnate în plăci simple sau plăci duble. Se lasă să se solidifice și se păstrează la frigider până la utilizare..
Se temperează înainte de utilizare. Deoarece este un mediu nesteril, se recomandă prepararea acestuia aproape de data utilizării sale..
PH-ul final al mediului trebuie să fie de 7,4 ± 0,2. Culoarea mediului preparat este roșu-portocaliu, translucid, fără precipitat..
Dacă aveți agar bazic Xylose Lysine (XL), puteți adăuga deoxicolat de sodiu, tiosulfat de sodiu și citrat de fier amoniu. În acest fel se obține formula de agar XLD.
Agarul XLD este utilizat pentru recuperarea enteropatogenilor, în principal din genul Shigella și în al doilea rând din genul Salmonella. Este util pentru evaluarea probelor de scaun, apă și alimente.
Probele de scaun pot fi însămânțate direct pe agar XLD, făcând o bună distribuție a materialului pentru a obține colonii izolate.
Pentru a îmbunătăți recuperarea Salmonella, agarul XLD poate fi însămânțat din medii de îmbogățire Salmonella..
În cazul alimentelor, pot fi utilizate bulionuri de îmbogățire pentru Salmonella și Shigella. Pentru Salmonella puteți folosi, printre altele, bulion de selenită cistină, bulion tetrationat verde aprins..
În cazul Shigella, poate fi îmbogățit cu bulion Shigella cu 0,5 µ / ml de novobiocină, incubat la 42 ° ± 1 ° C timp de 16-20 de ore.
În analiza apei, se recomandă, printre altele, tehnica filtrării cu membrană și utilizarea agarului XLD..
Mediul însămânțat este incubat aerob la 35 ° C timp de 24 până la 48 de ore..
Se observă coloniile tipice din fiecare gen, coloniile suspecte ar trebui să fie supuse unor teste biochimice pentru identificarea lor.
Următoarele tulpini bacteriene pot fi utilizate pentru a evalua controlul calității mediului: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.
Genul Salmonella se caracterizează prin prezentarea în acest mediu a coloniilor roșii cu un centru negru sau colonii complet negre. În timp ce, în genul Shigella, coloniile trebuie să fie roșii, adică culoarea mediului.
În cazul în care Escherichia coli se așteaptă să fie total sau parțial inhibat; dacă crește, coloniile sunt galbene. Pentru a Proteus mirabilis se așteaptă o creștere slabă cu coloniile roz cu sau fără un centru negru. În cele din urmă, genul Klebsiella va crește ca colonii galbene.
Agarul XLD este utilizat pe scară largă în laboratoarele de bacteriologie datorită eficienței sale ridicate pentru recuperarea Shigella și, de asemenea, are o bună recuperare a genului Salmonella.
Rall și colab. (2005) în lucrarea lor intitulată „Evaluarea a trei bulionuri de îmbogățire și cinci medii solide pentru detectarea Salmonella la păsări de curte” au demonstrat că din cele 3 medii clasice testate (agar verde strălucitor, agar SS și agar XLD), XLD agar a avut cea mai bună rată de recuperare.
Procentele de recuperare au fost după cum urmează: 13,8% pentru agar verde strălucitor, 27,6% pentru SS și 34,5% pentru XLD. A fost depășit doar de mediul cromogen Rambach agar cu recuperare de 48% și CHROMagar cu 79,3%.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.