Biuret este un reactiv utilizat pentru determinarea proteinelor cu lanț lung și cu lanț scurt. Este utilizat în special în domeniul chimiei analitice și al analizei urinei pentru a investiga concentrația proteinelor totale din ser, plasmă și urină..
Valorile proteinelor pot fi crescute sau scăzute în anumite patologii. Simptomele hipoproteinemiei apar de obicei la pacienții cu afecțiuni renale, la pacienții subnutriți și la pacienții cu infecții cronice..
În timp ce hiperproteinemia este observată în patologii precum mielom multiplu, lupus eritematos sistemic, endocardită bacteriană, meningită bacteriană, macroglobulinemia Waldenstrom, printre altele..
Pe de altă parte, prezența proteinelor în urină se datorează filtrării albuminei de către rinichi. Acesta este un comportament patologic care ar trebui studiat.
În acest sens, Biuret este foarte util, deoarece permite cuantificarea prezenței proteinelor în ser, plasmă, urină, printre multe alte probe..
Chiar și Biuret poate fi utilizat pentru a investiga prezența și concentrația proteinelor în probe prost explorate sau probe de compoziție necunoscută. Prin urmare, este utilizat pe scară largă în domeniul cercetării.
Testul Biuret se bazează pe detectarea legăturilor peptidice. Testul are loc într-un mediu alcalin. Proba trebuie să conțină cel puțin două legături peptidice pentru a se forma un complex violet-violet. Complexul este format din uniunea legăturilor și a ionului de cupru.
Indice articol
Reactivul Biuret este compus din hidroxid de potasiu, sulfat cupric și tartrat de sodiu și potasiu. Hidroxidul de sodiu este utilizat pentru alcalinizarea mediului, deoarece această condiție este esențială pentru ca reacția să aibă loc.
Substanțele care reacționează cu proteinele sunt sulfatul cupric, în timp ce tartratul de sodiu are funcția de a nu permite formarea hidroxidului de cupru, care tinde să precipite și să interfereze cu reacția..
Dacă în eșantion se găsesc substanțe cu legături peptidice (polipeptide sau proteine), testul va fi pozitiv.
O reacție este interpretată ca pozitivă atunci când soluția devine violetă. Culoarea este produsă prin formarea unui complex între cel puțin două legături peptidice care au gruparea CO-NH și cationii cuprici.
Complexul violet se poate forma în două moduri: unul este prin pierderea protonilor din grupele amide care se leagă de metal (depronotație), iar celălalt prin unirea electronilor de oxigen și azot care sunt liberi și se leagă..
Această reacție poate varia în intensitate și culoare în funcție de tipul de proteină..
Testul poate fi efectuat calitativ sau cantitativ. În forma calitativă, este raportat ca pozitiv sau negativ. În timp ce în formă cantitativă concentrația poate fi măsurată prin metoda spectrofotometrică.
Reacția este citită între 540-560 nm. Intensitatea culorii este direct proporțională cu concentrația legăturilor peptidice din probă..
-Hidroxid de sodiu (NaOH) 20%
-1% sulfat de cupru pentahidrat (CuSO4. 5HDouăSAU)
-Tetrahidrat de sodiu potasiu mixt tetrahidrat (KNaC4H4SAU64HDouăSAU)
-Trebuie păstrat la frigider.
-Așezați 100 µl din eșantion sau standard pentru a fi analizat într-o eprubetă.
-Se adaugă 2 ml hidroxid de sodiu.
-Se amestecă foarte bine.
-Adăugați 5 ml de reactiv Biuret.
-Se amestecă și se lasă să stea 25 de minute la temperatura camerei, se acoperă și se protejează de lumină.
-Observați formarea sau nu a culorii și măsurați spectrofotometric.
Albumina serică bovină poate fi utilizată ca standard pentru efectuarea curbei de calibrare. Din acesta se prepară diverse concentrații. De exemplu 25, 50, 75, 100, 125 și 150%.
Reacția este configurată cu toate aceste concentrații cunoscute și absorbția este citită la o lungime de undă de 540 nm. Cu datele despre concentrațiile cunoscute și citirile de absorbanță se realizează curba de calibrare.
În fiecare determinare sau lot de probe prelucrate se recomandă montarea unui standard. Albumina serică bovină 0,1-2 mg / ml poate fi utilizată ca standard de calibrare..
Măsurătorile se fac pe un spectrofotometru la 540 nm.
Liniaritatea este îndeplinită până la o concentrație de 12 g / dl.
Deși nu este foarte frecvent, trebuie remarcat faptul că unele substanțe pot interfera în timpul executării acestui test. De exemplu, prezența amoniacului poate inhiba formarea culorii.
La fel, alte substanțe ar putea absorbi la aceeași lungime de undă, cum ar fi anumiți pigmenți..
Pe de altă parte, interferența poate fi generată atunci când o altă substanță decât legătura peptidică formează un complex cu sarea cuprică. Exemplu: unii carbohidrați și anumite lipide.
Dacă proba de analizat prezintă un anumit tip de precipitat, acesta trebuie filtrat sau centrifugat înainte de montarea testului..
Testul nu este afectat de prezența:
-Bilirubina până la o concentrație de 20 mg / dl.
-Hemoglobina până la o concentrație de 750 mg / dl.
-Dextran până la o concentrație de 30 g / L.
-Trigliceride până la o concentrație de 4000 mg / dl.
-Este o metodă simplă de executat.
-Este un test economic.
-Are o specificitate ridicată pentru proteine.
-Mică interferență.
Are o sensibilitate slabă pentru a detecta cantități mici de proteine. Munca efectuată de Fuentes și colaboratori afirmă că metoda de testare Biuret are o limită de detectare de 1 mg / ml de proteină și o limită de cuantificare de 3 mg / ml.
Cu toate acestea, alte cercetări efectuate la Universitatea din Amazonia raportează valori mult mai mici. Limita de detecție raportată de studiu este de 0,020 mg / ml, iar limita de cuantificare este de 1,33 mg / ml..
Reactivul sau testul Biuret este utilizat pentru determinarea proteinelor în probe clinice și neclinice în laboratoare de rutină și de cercetare.
În multe patologii este important să se determine concentrația proteinelor totale în probele clinice, care pot fi mari sau scăzute.
Ele sunt ridicate în:
-Mielom multiplu,
-Lupus eritematos sistemic,
-Endocardită bacteriană,
-Meningită bacteriană,
Macroglobulinemia Waldenstrom, printre altele.
Se reduce în:
-Insuficiență renală,
-Persoanele cu grade severe de malnutriție,
-Pacienții cu infecții cronice, printre altele.
Cele mai frecvente probe clinice sunt serul, plasma și urina. Valoarea normală a proteinelor din ser sau plasmă este de 6,0-8,8 gr / dl.
Concentrația de proteine în urină la adulți nu depășește cifra de 150 mg / 24 ore.
Sugari: < a 0,50 mg
Copii cu vârsta de 2 ani și peste: indice: 0,20 mg
Adulți: < 0,2 mg
Reacția Biuret poate fi utilizată pentru multe tipuri de probe non-clinice, cum ar fi produse lactate, antivenin sau orice substanță necunoscută pentru care doriți să investigați prezența proteinelor..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.