Bromură de etidiu Este un compus fluorescent și aromatic care are capacitatea, datorită structurii sale chimice, de a se intercala între lanțurile ADN. De asemenea, se leagă de molecule de ARN foarte pliate. Acest lucru permite o interacțiune între această sare și bazele azotate..
Bromura de etidiu absoarbe lumina ultravioletă într-un interval de lungime de undă de la 210 nm la 285 nm, emitând o fluorescență portocalie de 605 nm. Intensitatea fluorescenței sale crește de până la 20 de ori atunci când interacționează cu ADN-ul.
Datorită proprietății sale de fluorescență, bromura de etidiu este utilizată pentru a vizualiza fragmente de ADN separate prin electroforeză cu agaroză (imaginea superioară); tehnică introdusă independent de Aaij și Borst (1972) și Sharp (1973).
Bromura de etidiu, atunci când este intercalată între lanțurile ADN, ar putea, de asemenea, să împiedice procesele sale de duplicare și transcripție; și, prin urmare, să fie cauza generației mutațiilor. Cu toate acestea, nu există dovezi concludente care să susțină această presupunere..
Indice articol
În imaginea superioară avem structura moleculară a bromurii de etidiu reprezentată de formula sa structurală.
Molecula este aproape total plană, deoarece toți atomii sistemului formați din cele trei inele (fenantridină) și atomul de azot încărcat pozitiv au hibridizare spDouă. Dar nu se întâmplă în același mod cu grupurile lor substituente.
Gruparea fenil din extrema dreaptă, grupările amino și gruparea etil atașată la azotul încărcat sunt responsabile pentru absorbția sistemului de lungimi de undă UV care caracterizează ulterior fluorescența bromurii de etidiu..
Pe de altă parte, rețineți că interacțiunile lor intermoleculare sunt guvernate în principal de atracții electrostatice; și într-un grad mai mic, ele sunt ținute împreună de forțele dispersive londoneze ale inelelor.
Bromură de etidiu.
Denumire IUPAC: bromură de 3,8-diamino-5-etil-6-fenilfenantridiniu.
Sinonime: bromură de omide și Dromilac.
Cdouăzeci și unuHdouăzeciN3Fr
Cristale roșu închis sau apare ca o pulbere maro.
Amar.
Solid inodor.
260 - 262 ºC (se descompune).
> 100 ° C
40 g / L la 25 ° C în apă și în etanol 2 mg / ml.
0,34 g / cm3
1.210-12 mmHg la 25 ° C (estimat).
Log Kow = - 0,38
Când este încălzit până la descompunere, bromura de etidiu emite un fum foarte toxic de bromură de hidrogen și oxizi de azot..
Stabil și incompatibil cu agenți oxidanți puternici.
1,67 (estimat).
4-7 într-o soluție de 2% în apă.
Reacția în lanț a polimerazei, PCR, face posibilă obținerea multor copii într-un mod exponențial pornind de la un fragment de ADN. Tehnica se bazează pe proprietatea enzimei ADN polimerază de a reproduce firele de ADN din fragmentele sale care servesc drept șablon..
Este o tehnică care are multe aplicații, inclusiv detectarea mutațiilor legate de bolile ereditare; teste de paternitate; identificarea unei persoane care a comis o infracțiune etc..
Bromura de etidiu ajută la identificarea fragmentelor de ADN, produse ale degradării enzimatice a acestora care pot fi utilizate în tehnica PCR.
Bromura de etidiu este încorporată în gel înainte de efectuarea electroforezei. Compusul este blocat între benzile ADN și produce o fluorescență atunci când este expus la lumina ultravioletă, care servește la dezvăluirea fragmentelor de ADN care sunt separate în electroforeză.
Modelul de fluorescență al electroforezei servește drept orientare cu privire la originea fragmentelor de ADN. Legarea bromurii de etidiu la ADN modifică conformația, sarcina, greutatea și flexibilitatea moleculei de ADN, ceea ce duce la o reducere a mobilității macromoleculei..
Acest efect crește pe măsură ce crește dimensiunea fragmentului de ADN..
Bromura de etidiu a început să fie utilizată în tratamentul tripanosomiazei la bovine în anii 1950, sub numele de Homidio. De acolo a venit denumirea de bromură de omidă ca sinonim pentru bromură de etidiu.
Utilizarea terapeutică a bromurii de etidiu se bazează pe toxicitatea sa asupra mitocondriilor. Acest lucru se manifestă printr-o reducere a numărului de copii ale ADN-ului mitocondrial..
Bromura de etidiu se leagă de moleculele ADN ale kinetoplastului tripanosom și își modifică conformația cu ADNz. Această formă de ADN este letală, deoarece replicarea sa este inhibată.
Injecția directă de bromură de etidiu în cisterna magna a produs o leziune reproductibilă de pierdere acută a mielinei în trunchiul cerebral al șobolanilor. Aceeași injecție a măduvei spinării la pisici a produs o leziune comparabilă cu cea observată la șobolani.
Scleroza multiplă este o boală autoimună a sistemului nervos, în care sistemul imunitar distruge mielina, o substanță care acoperă neuronii.
Bromura de etidiu este considerată un compus toxic, deoarece prin inhalare provoacă iritații acute ale căilor respiratorii. La fel, prin contactul cu pielea, bromura de etidiu poate provoca inflamații și / sau decolorare..
Între timp, la ochi, expunerea acută provoacă iritații, roșeață și dureri de ochi. Prin urmare, se recomandă ca materialul utilizat cu bromură de etidiu să fie manipulat cu Fișa cu date de securitate a materialului (MSDS)..
Bromura de etidiu este considerată un compus extrem de mutagen, deoarece, atunci când este intercalată în ADN, ar putea afecta duplicarea și transcrierea acestuia, provocând mutații; și chiar s-a subliniat o posibilă acțiune cancerigenă.
Testul AMES a detectat inducerea mutațiilor de către bromură de etidiu la bacterii numai atunci când s-a utilizat un omogenat hepatic în test..
Acest lucru ne-a determinat să credem că nu este direct responsabilă de apariția mutațiilor la bacterii, ci că acestea ar putea fi consecința acțiunii unui metabolit generat în interacțiunea bromurii de etidiu cu omogenatul hepatic..
Pe de altă parte, Programul de toxicologie naturală a stabilit că bromura de etidiu nu a fost mutagenă pentru șobolani și șoareci. În ciuda acestui fapt, utilizarea sa este redusă în laboratoarele care o utilizează în cercetarea lor..
Cu toate acestea, concentrația de bromură de etidiu utilizată în investigații este de o miime din concentrația dozei date bovinelor în tratamentul tripanosomiazei, fără apariția mutațiilor..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.