bulion de uree Este un mediu de cultură lichid, utilizat pentru a arăta prezența enzimei ureaze în anumite microorganisme. Ureaza este o enzimă microbiană care este produsă într-un mod constitutiv, adică este sintetizată indiferent dacă este sau nu substratul pe care acționează..
Funcția ureazei este legată de descompunerea compușilor organici. Nu toate microorganismele sunt capabile să sintetizeze această enzimă, prin urmare determinarea sa în laborator permite identificarea anumitor tulpini bacteriene și chiar diferențierea între specii din același gen..
Există două tipuri de teste de uree: Stuart și Christensen. Ele diferă prin compoziție și sensibilitate. Primul este special pentru a arăta o cantitate mare de urează produsă de speciile din genul Proteus.
Al doilea este mai sensibil și poate detecta cantități mici de uree generate târziu de alte genuri bacteriene, cum ar fi Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter și Mycobacterium.
Bulionul de uree al lui Stuart este compus din uree, clorură de sodiu, fosfat dipotazic, fosfat monopotassic, extract de drojdie, roșu fenol și apă distilată.
Între timp, bulionul sau agarul de uree Christensen este compus din peptoni, clorură de sodiu, fosfat monopotassic, glucoză, uree, roșu fenol, apă distilată și agar-agar. Acesta din urmă numai dacă este mediul solid.
Indice articol
Enzima urează hidrolizează ureea pentru a forma dioxid de carbon, apă și două molecule de amoniac. Acești compuși reacționează pentru a forma produsul final numit carbonat de amoniu..
Bulionul de uree al lui Stuart este mai tamponat cu un pH de 6,8. Prin urmare, microorganismul trebuie să poată forma cantități mari de amoniac pentru a transforma fenolul în roșu. PH-ul ar trebui să crească peste 8.
Prin urmare, bulionul de uree al lui Stuart este selectiv pentru speciile Proteus, oferind rezultate pozitive în decurs de 24 până la 48 de ore de la incubație și nu este eficient pentru bacteriile care produc cantități mici de uree sau care hidrolizează încet ureea..
Acest lucru se datorează faptului că speciile Proteus pot folosi ureea ca sursă de azot. În schimb, alte bacterii producătoare de urează au nevoie de o sursă suplimentară.
Cu toate acestea, Pérez și colab. (2002) au stabilit că bulionul de uree al lui Stuart a fost la fel de eficient ca agarul de uree al lui Christensen, pentru a determina ureaza din tulpinile de drojdie din genurile Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon și Saccharomyces.
Autorii studiului susțin că au obținut un acord de 100% cu ambele medii (Stuart și Christensen) atunci când au incubat timp de 24 și 48 de ore; cu excepția faptului că tulpinile care au reușit să transforme media într-o culoare roz-fuchsia puternică au fost luate ca pozitive.
Această clarificare este necesară, deoarece Lodder (1970) a afirmat că aproape toate drojdiile reușesc să transforme conica agarului de uree Christensen în roz pal. Acest lucru se datorează faptului că pot hidroliza ureea în cantități mici și datorită formării de amine prin decarboxilarea oxidativă a aminoacizilor de la suprafață. Acest lucru nu trebuie interpretat ca fiind pozitiv.
Bulionul sau agarul de uree al lui Christensen este mai puțin tamponat, fiind capabil să detecteze cantități mici de amoniac. În plus, acest mediu este îmbogățit cu peptoni și glucoză. Acești compuși determină creșterea altor microorganisme producătoare de urează care nu cresc în bulionul Stuart..
La fel, testul de uree Christensen oferă rezultate mai rapide, în special pentru Proteus, fiind capabil să dea puternic pozitiv în doar 30 de minute ca timp minim și până la 6 ore ca timp maxim.
Restul microorganismelor producătoare de urează reușesc să transforme culoarea mediului ușor după 6 ore și puternic după 24, 48, 72 ore sau mai mult, și chiar unele tulpini pot da reacții slabe după 5 sau 6 zile.
Mediul este inițial de culoare galben-portocaliu și o reacție pozitivă va transforma culoarea mediului în roz-fuchsia. Intensitatea culorii este direct proporțională cu cantitatea de amoniac produsă.
O reacție negativă va părăsi mediul de culoare originală, cu excepția drojdiilor, care pot deveni roz pal pe mediul de agar uree Christensen..
Se cântăresc gramele necesare conform indicațiilor companiei comerciale. Se dizolvă în apă distilată de preferință sterilă. Nu folosiți căldură pentru a dizolva, deoarece ureea este sensibilă la căldură.
Metoda de filtrare cu membrană este utilizată pentru sterilizare. Pentru aceasta, se folosește un filtru Millipore cu pori de 0,45 µ diametru. Nu utilizați o autoclavă. Odată ce soluția este filtrată, aceasta este distribuită în tuburi sterile. Pentru a obține rezultate fiabile, trebuie transferat între 1,5 ml ca cantitate minimă și 3 ml ca cantitate maximă pe tub..
A se păstra la frigider și se încălzește înainte de utilizare..
Dacă metoda de filtrare nu este disponibilă, mediul trebuie utilizat imediat pentru rezultate fiabile..
O altă modalitate de a pregăti bulionul de uree al lui Stuart este după cum urmează:
Unele case comerciale vând mediul de bază pentru testul ureei, fără a include ureea..
Cantitatea indicată de societatea comercială este cântărită. Se dizolvă în apă distilată și se sterilizează în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute. Lăsați-l să se odihnească puțin și când mediul este cald, adăugați 100 ml dintr-o soluție de uree preparată la 20% și sterilizată prin filtrare..
Se distribuie în tuburi sterile, așa cum s-a descris anterior.
Se cântăresc 29 g de uree deshidratată și se dizolvă în 100 ml de apă distilată. Folosiți metoda de filtrare pentru a steriliza. Nu faceți autoclavă.
Se dizolvă 24 g de agar de bază deshidratat în 950 ml de apă distilată. Sterilizați în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute. Lăsați să stea până ajunge la o temperatură de 50 ° C și adăugați uree preparată anterior aseptic.
Se toarnă 4 până la 5 ml în tuburi sterile și se înclină până se solidifică. Ar trebui să existe un cioc lung de flaut.
Acest mediu poate fi preparat și sub formă lichidă.
Testul ureei este extrem de eficient în a distinge genul Proteus de alte genuri din familia Enterobacteriaceae, dată fiind reacția rapidă oferită de Proteus..
Folosind compoziția Christensen, testul ajută la diferențierea între specii din același gen. De exemplu, S. haemolyticus și S. warneri spe Stafilococ coagulază negativă și beta-hemolitică, dar ele diferă prin asta S. haemolyticus este uree negativă și S. warneri este uree pozitivă.
Pe de altă parte, McNulty a folosit cu succes bulionul de uree de 2% al lui Christensen pentru a studia prezența Helicobacter pylori în probe de biopsie prelevate din mucoasa gastrică (regiunea antrală).
Prezenta lui H. pylori se dovedește printr-un test de uree pozitiv. Durata de timp pentru observarea rezultatelor este direct proporțională cu cantitatea de microorganisme prezente.
După cum se poate observa, este o metodă simplă pentru diagnosticarea Helicobacter pylori în biopsiile gastrice.
În cele din urmă, acest test este, de asemenea, util pentru a diferenția speciile din genurile Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus și Mycobacteria..
Ambele metode necesită un inocul microbian puternic pentru a optimiza rezultatele. Coloniile bacteriene sunt de preferință luate din agar de sânge și drojdii din agar Sabouraud, cu câteva excepții. Inoculul este emulsionat în mediu lichid.
Pentru bulionul de uree al lui Stuart, incubați la 37 ° C timp de 24 până la 48 de ore, știind că sunteți în căutarea tulpinilor din genul Proteus numai atunci când tulpina este o bacterie. Pentru drojdii se poate incuba la 37 ° C sau la temperatura camerei timp de 24 până la 48 de ore de incubare.
În cazul bulionului de uree Christensen, acesta este incubat la 37 ° C timp de 24 de ore. Dacă testul este negativ, acesta poate fi incubat până la 6 zile. Dacă testul este pozitiv înainte de 6 ore, indică faptul că este o tulpină din genul Proteus.
În cazul agarului de uree al lui Christensen, teșirea agarului este inoculată puternic, fără a fi perforată. Bulionul este incubat și interpretat în același mod.
Controlează tulpini precum Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 și Salmonella typhimurium. Primele două ar trebui să dea rezultate pozitive, iar ultimele două rezultate negative..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.