Testul Voges-Proskauer este un test biochimic folosit pentru a ajuta la identificarea bacteriilor aparținând familiei Enterobacteriaceae. Este deosebit de util pentru diferențierea tulpinilor de Escherichia coli din Klebsiella și Enterobacter, printre altele.
Testul se efectuează într-un mediu de cultură lichid numit Methyl Red-Voges Proskauer, mai cunoscut sub acronimul RM / VP. Acest mediu este compus din polipeptonă tamponată, glucoză, fosfat dipotasic și apă distilată..
Mediul RM / VP actual este o modificare a mediului Clark și Lubs, care inițial conținea o concentrație mai mică de peptoni și glucoză. Prin urmare, s-a produs mai puțin ion de hidrogen, necesar pentru reacția pozitivă Voges-Proskauer..
Testul se bazează pe capacitatea microorganismului de a utiliza glucoza pe calea butilen-glicol și de a forma un produs final neutru numit acetoină, în prezența oxigenului și a unui pH alcalin.
În mediul RM / VP, pe lângă faptul că este capabil să dezvăluie testul Voges-Proskauer, testul roșu de metil poate fi, de asemenea, dezvăluit.
Indice articol
Pluripeptonii prezenți în mediu asigură cerințele nutriționale esențiale pentru creșterea bacteriană. La rândul său, glucoza este principalul compus. Multe bacterii au capacitatea de a metaboliza glucoza și de a forma acid piruvic.
Acidul piruvic este un punct de mijloc în metabolismul glucozei și de acolo fiecare microorganism poate lua căi diferite. Unele vor forma acizi amestecați, cum ar fi acidul lactic, acidul acetic, acidul formic și acidul succinic, iar alții vor forma produse neutre precum 2,3-butandiol..
Testul Voges-Proskauer relevă capacitatea microorganismului de a forma acetil metil carbinol (acetoin), un produs intermediar al 2,3-butandiolului în condiții aerobe..
Acetoina este redusă și formează 2,3-butandiol, dar această reacție este reversibilă, deci dacă 2,3-butandiol este oxidat, se formează acetoină. Prin urmare, oxigenul este esențial.
Fosfatul dipotasiic este tamponul care tamponează amestecul la pH 6,9 ± 0,2.
Pentru a demonstra reacția, trebuie realizată o dezvoltare folosind doi reactivi (reactivi Barrit), cunoscuți sub numele de Voges A și Voges B.
Voges A este o soluție de 5% de α-naftol, iar Voges B este un preparat de hidroxid de potasiu 40%. Dacă hidroxidul de potasiu nu este disponibil, acesta poate fi înlocuit cu hidroxid de sodiu 40%.
Α-Naphthol este un catalizator care va crește intensitatea culorii reacției, făcând testul mai sensibil. A-naftolul trebuie întotdeauna adăugat mai întâi, agitând tubul astfel încât mediul să intre în contact cu oxigenul. În acest fel, acetoina prezentă este oxidată la diacetil, iar 2,3-butandiol este oxidat pentru a forma acetoină, trecând aceasta la diacetil..
Acesta este modul în care α-naftolul se va lega de diacetil, care la rândul său s-a alăturat nucleului de guanidină prezent în aminoacidul arginină, acesta din urmă provenind de la pluripeptoni.
La rândul său, hidroxidul de potasiu sau de sodiu este responsabil pentru absorbția CODouă și de a reacționa cu peptonele. Această reacție determină formarea unei culori roz-somon, clar vizibilă după agitarea foarte bună a tubului..
Cantitățile corecte de diacetil, peptonă și α-naftol trebuie amestecate pentru ca culoarea să apară instantaneu. Dacă acest lucru nu se întâmplă, tubul este lăsat să se odihnească timp de 15 minute înainte de interpretare..
De obicei, testul este pozitiv după 2 până la 5 minute, când se vede o culoare roz slabă. Dacă este lăsat să se odihnească timp de 30 min până la 1 oră, intensitatea culorii va fi maximă (roșu intens).
Un test negativ va apărea atunci când bulionul devine galben. După 1 oră, dacă testul este negativ, se poate forma o culoare cupru ca urmare a reacției hidroxidului de potasiu pe α-naftol.
Se cântăresc 17 g de mediu de cultură deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Lasati sa stea 5 minute. Se încălzește la fierbere pentru a se dizolva complet. Se servesc 3 până la 4 ml în tuburi și se sterilizează în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.
Mediul de cultură deshidratat este de culoare bej, iar mediul preparat este de culoare chihlimbar deschis..
PH-ul final al mediului este de 6,9 ± 0,2.
Se cântăresc 5 g de α-naftol și se dizolvă în 50 ml alcool etilic (absolut). Apoi continuați să adăugați alcool etilic până ajunge la 100 ml..
Se cântăresc 40 g de hidroxid de potasiu și se dizolvă în 50 ml de apă distilată într-un pahar. Paharul trebuie pus într-o baie de apă rece pentru a controla temperatura, deoarece atunci când preparatul este dizolvat, temperatura crește brusc.
După ce soluția este rece, se transferă într-un balon volumetric și se completează până la 100 ml cu apă distilată..
Pentru efectuarea testului Voges-Proskauer, un bulion RM / VP este inoculat cu microorganismul studiat, dintr-o cultură pură timp de 18 până la 24 de ore..
Inoculul nu trebuie să fie foarte dens. Se incubează la 35-37 ° C timp de 24 până la 48 de ore, deși este uneori necesară incubarea timp de câteva zile. Cowan și Steel consideră că 5 zile este timpul minim de incubație necesar pentru a detecta toate speciile pozitive Voges-Proskauer (VP) din familia Enterobacteriaceae..
Separați o alicotă de 1 mL într-un tub și dezvoltați-vă după cum urmează: Plasați 12 picături (0,6 mL) de reactiv Voges A și 4 picături (0,2 mL) de Voges B. Se amestecă pentru aerare și se lasă să se stabilească timp de 5 - 10 minute înainte de interpretare. Cu toate acestea, dacă testul este încă negativ, lăsați-l să stea și să observe tubul după 30 de minute până la 1 oră..
Apariția unei culori roșu-roz arată că reacția Voges-Proskauer este pozitivă. Dacă mediul rămâne galben, reacția este negativă.
Adăugarea dezvoltatorilor în ordinea și cantitatea indicată este esențială pentru a evita negative negative..
Testul Voges-Proskauer este util pentru a diferenția între tulpini de E coli care sunt VP negative, din genurile Klebsiella, Enterobacter, Serratia, printre altele, care sunt VP pozitive.
Tulpinile de control pot fi utilizate pentru a testa calitatea mediului preparat, inclusiv Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium și Enterobacter cloacae ATCC 13047.
Rezultatele așteptate sunt reacții pozitive Voges-Proskauer numai pentru K. pneumoniae Da E. cloacae. Restul dau reacții negative.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.