colorarea capsulei este o tehnică de colorare diferențială care are proprietatea de a evidenția structura polizaharidelor care înconjoară anumite bacterii și drojdii numite capsule. Este utilizat în laboratoarele clinice pentru a ajuta la diagnosticarea anumitor patologii cauzate de microorganisme capsulate..
De asemenea, este utilizat în laboratoarele didactice pentru demonstrarea acestei structuri morfologice studenților din carierele științelor sănătății, precum: medicină, bioanaliză, asistență medicală sau citotehnologie, printre altele..
Există mai multe tehnici simple pentru a demonstra prezența capsulei în microorganismele care o posedă, acestea sunt: pata negativă, pata Anthony și o variantă care combină cele două precedente..
Colorarea negativă este utilizată în principal în probele de LCR atunci când se suspectează prezența drojdiei. Cryptococcus neoformans. Această drojdie este o cauză comună a meningitei.
Această tehnică folosește cerneală nigrosină sau India și se bazează pe crearea unui contrast între fundalul preparatului și capsula impenetrabilă a microorganismului. Fundalul devine întunecat și capsula este incoloră. În acest fel, această structură este evidențiată.
În ceea ce privește tehnica Anthony, se poate spune că este folosită în special în laboratoarele didactice pentru a demonstra structura polizaharidelor la bacterii, cum ar fi Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae Da Neisseria meningitidis.
Utilizarea acestei tehnici în scopuri de diagnostic este foarte rară, deoarece există alte teste de rutină care permit identificarea acestor microorganisme..
Indice articol
Capsula este o structură puternică de natură polizaharidică. Aceasta protejează microorganismele de fagocitoză și, prin urmare, este o structură dificil de pătruns.
De aceea petele de capsule se bazează pe contrast. Coloranții colorează fundul preparatului în timp ce capsula rămâne incoloră.
Prin urmare, cu aceste tehnici capsula este ușor de recunoscut. Dacă microorganismul nu are o capsulă, nu se va distinge cu acest tip de colorare, deoarece totul va fi colorat de aceeași culoare..
Toate tehnicile utilizate pentru colorarea capsulei au același motiv, în ciuda utilizării coloranților și procedurilor diferite..
Pata lui Anthony folosește violetul de cristal ca o pată. Acest lucru va pata corpul bacterian și fundalul purpuriu.
Pe de altă parte, se utilizează 20% sulfat de cupru. Aceasta servește ca o soluție de spălare, adică elimină excesul de cristal violet din preparat, făcând capsulele clare, dar fără a pierde culoarea corpului bacterian sau a fundalului..
- Lapte irizat.
- Diapozitiv pentru microscop.
- 1% Cristal Violet.
- 20% sulfat de cupru.
- Microscop optic.
- Ulei de imersie.
Această tehnică constă din:
Este important să nu folosiți căldura nici pentru fixare, nici pentru uscare, deoarece acest lucru deteriorează capsula. De asemenea, nu vă spălați cu apă.
Laptele irizat este un mediu de cultură excelent, deoarece oferă substanțele nutritive necesare microorganismului pentru a dezvolta o capsulă proeminentă.
Pe de altă parte, laptele irizat va forma un fund gros și compact care va fi colorat în violet împreună cu corpul bacterian, dar capsula care înconjoară microorganismul va rămâne incoloră. Prin urmare, în jurul corpului bacterian se observă un halou clar..
Este o tehnică simplă de realizat. Nu este necesară repararea.
De asemenea, trebuie remarcat faptul că pot fi utilizate și alte medii de cultură, dar mediul de lapte este preferat deoarece are avantajul că oferă capsule mai proeminente..
Este o tehnică puțin mai laborioasă decât colorarea negativă, iar vizualizarea sa necesită așteptarea preparatului să se usuce complet..
- Diapozitive pentru microscop.
- Mediu de cultură cu microorganismul.
- Cerneală chineză sau nigrozină.
- Microscop optic.
- Soluție salină fiziologică.
Așezați o picătură de ser fiziologic pe lamela de acoperire și dizolvați o mică porțiune din cultura microbiană. Este important ca preparatul să nu fie prea gros. Apoi puneți o picătură de cerneală chinezească sau nigrozină și amestecați.
O foaie de acoperire este apoi plasată peste preparat fără a revărsa lichidul. Se observă la microscop concentrându-se mai întâi pe un obiectiv de 10X și apoi trecând la 40X.
Această tehnică poate fi utilizată și pe probele de CSF direct. Adică, în loc de a pune o picătură de cultură microbiană, este plasată o picătură de LCR.
Este o metodă simplă de realizat și în același timp ieftină. Nu necesită fixarea sau uscarea preparatului.
Are dezavantajul că trebuie observat la microscop înainte ca preparatul să se usuce, deoarece dacă se întâmplă acest lucru microorganismele se vor contracta, ceea ce va face vizualizarea dificilă..
Pe de altă parte, falsul pozitiv poate apărea dacă analistul nu are experiență, deoarece leucocitele sunt adesea confundate cu drojdiile..
Observarea capsulelor de drojdie cu tehnica chinezească de cerneală sau nigrozină ar trebui considerată ca un diagnostic prezumtiv al Cryptococcus neoformans până se demonstrează cu cultura.
Acest lucru se datorează faptului că există alte drojdii care ar putea fi cauza meningitei și nu doar a Cryptococcus neoformans, precum cele din genul Candida și Rhodotorula, precum și alte specii de Cryptococcus.
Dacă există microorganisme capsulate, se va observa un fundal întunecat, cu corpuri transparente plutind în lichid, evidențiind prezența capsulei..
Această tehnică se poate face și cu nigrozină. Este o combinație a tehnicilor explicate anterior. Această tehnică folosește violet cristal și cerneală indiană sau nigrozină.
Corpul bacterian devine violet din cristalul violet deoarece este încărcat negativ, în timp ce nigrosina colorează fundul frotiului. Dacă bacteria are o capsulă, aceasta va apărea ca un halou transparent în jurul microorganismului..
Violetul de cristal poate fi înlocuit cu oricare dintre aceste culori: safranină, fucsină de bază sau albastru de metilen.
- Sticlă violetă.
- Nigrozină sau cerneală indiană.
- Diapozitive pentru microscop.
- Microscop.
- Cultivați microorganismul într-un mediu de cultură.
- Așezați o picătură de cultură la capătul unui diapozitiv și lângă aceasta, așezați o picătură de cerneală India de cristal sau nigrozină, amestecați și răspândiți cu capătul altui diapozitiv..
- Uscați la aer și nu încălziți setul.
- Se acoperă cu o soluție de cristal violet timp de 1 minut, se spală cu apă distilată, dar foarte delicat (curent delicat), se lasă să se usuce la aer.
- Observați la microscop cu un obiectiv de imersiune. Căutați către capetele răspândirii.
Se va vedea un corp bacterian de culoare violet și un fundal întunecat. Capsula, dacă este prezentă, va apărea incoloră în jurul bacteriilor.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.