Mai Grünwald-Giemsa pata o Pappenheim este o tehnică de colorare diferențială care amestecă reactivii Giemsa și May Grünwald. Este utilizat pentru diferențierea celulelor sanguine normale și anormale în frotiurile de sânge periferic și de măduvă osoasă, precum și pentru colorarea secțiunilor histologice și a probelor citologice..
Ambii reactivi -Giemsa și May Grünwald- sunt derivați din colorarea de tip Romanowsky, o tehnică care se bazează pe combinația de coloranți acizi și bazici..
Giemsa a îmbunătățit tehnica prin stabilizarea amestecului de eozină, albastru de metilen și derivații acestora, cu glicerol. În schimb, May Grünwald folosește eozină și albastru de metilen, folosind metanol ca solvent. Această combinație strategică a dat rezultate excelente.
Deși, în ceea ce privește observarea morfologiei celulare, acționează într-un mod similar cu petele Giemsa și Wright, această tehnică le îmbunătățește pe cele anterioare prin rafinarea colorării paraziților care provoacă malarie, boala Chagas, leishmanioză și trichomoniasis..
În plus, sa dovedit a fi o tehnică foarte utilă pentru studiul citologic al lichidului spermatic. S-a remarcat nu numai prin prezentarea caracteristicilor morfologice ale spermatozoizilor, ci și prin permiterea diferențierii leucocitelor, a celulelor epiteliale și a celulelor spermatogenezei cu o eficiență mare..
Indice articol
Tehnica urmează fundamentul petelor Romanowsky, în care coloranții acizi au afinitate selectivă pentru componentele celulare bazice, iar componentele acide atrag petele bazice..
Explicați într-un alt mod, atât structurile celulare, cât și coloranții au sarcini electrice pozitive sau negative; precum taxele se resping și diferitele taxe atrag.
De exemplu, coloranții de bază precum albastrul de metilen sunt încărcați pozitiv și atrași de structurile încărcate negativ. De aceea, acest colorant colorează nuclee bogate în ADN și ARN care au grupări fosfat încărcate negativ..
Se colorează și granulele bazofilelor segmentate și citoplasmele celulelor albe mononucleare din sânge care conțin ARN..
De asemenea, colorantul acid poartă o sarcină negativă, motiv pentru care se leagă de structurile încărcate pozitiv, cum ar fi eritrocitele și granulele eozinofilelor segmentate. În ceea ce privește granulele neutrofilelor segmentate, acestea fixează ambii coloranți.
În această tehnică, o combinație de reacții coexistă între coloranții ortocromatici și metacromatici. Ortocromatica (eozină și albastru de metilen) se leagă de structura celulară de care sunt legate și oferă o culoare stabilă, care nu variază.
Pe de altă parte, metacromatica (derivații albastru de metilen azur A și azur B) își variază culoarea originală odată atașată la structura specifică și poate exista chiar o varietate de nuanțe.
În cele din urmă, pasul pe care îl face soluția May Grünwald necesită prezența apei, deoarece fără aceasta vopseaua va pătrunde în structuri, dar nu se va fixa. Pentru ca acest lucru să se întâmple, vopseaua trebuie să devină polară sau ionizată și astfel să poată precipita și să se lege de structurile conexe..
- Diapozitive pentru microscop.
- Poduri de colorat.
- Soluție mai-Grünwald.
- Pata Giemsa.
- Apa distilata.
0,25 g albastru de eozină-metilen (pata conform lui May Grünwald) trebuie cântărite și dizolvate în 100 ml de metanol. Apoi preparatul se amestecă 1 oră și se lasă să se odihnească 24 de ore. Când timpul a trecut, acesta se scurge.
Pentru a aplica tehnica, vopseaua May Grünwald trebuie diluată după cum urmează: pentru 200 ml de vopsea diluată, măsurați 30 ml de soluție concentrată, adăugați 20 ml de soluție tampon și 150 ml de apă distilată ajustată la pH 7,2-7,3. Ulterior se amestecă și se filtrează.
0,5 g de azur-eozină-albastru de metilen (pata conform Giemsa) trebuie cântărite, dizolvate în 50 ml de metanol și 50 ml de glicerină adăugate la amestec.
Pentru a efectua tehnica, se diluează 1:10 cu soluție tampon și se lasă să stea timp de 10 minute. Poate fi filtrat dacă este necesar.
Acestea ar trebui cântărite:
- 40 mg di-hidrogen fosfat de potasiu (KH2PO4).
- 151 mg hidrogen fosfat di-sodic 12-hidrat (Na2HPO4).
Ambii compuși sunt dizolvați în 100 ml de apă.
Există două moduri: unul clasic și unul rapid.
Tehnicile descrise aici sunt un ghid, dar trebuie luat în considerare faptul că procedurile și timpii de colorare variază în funcție de compania comercială care distribuie reactivii. Este recomandabil să urmați pașii strict indicați de fiecare casă comercială.
1- Acoperiți frotiul cu un strat subțire de soluție May Grünwald timp de 4 minute.
2- Îndepărtați colorantul și spălați-l cu apă distilată.
3- Puneți un strat de Giemsa diluat (1:10) în apă distilată timp de 15 minute.
4- Îndepărtați colorantul și spălați-l cu apă distilată.
5- Lăsați să se usuce și observați la microscop.
Tehnica necesită ca reactivii și soluțiile de spălare să aibă un pH ajustat la 7,2 -7,3, astfel încât afinitățile coloranților pentru structurile celulare să nu fie distorsionate și culoarea finală așteptată să nu varieze..
Această tehnică este utilizată de laboratoarele clinice pentru a colora frotiurile din sângele periferic și măduva osoasă, secțiunile de țesut și citologiile..
În domeniul hematologic, această tehnică are o importanță vitală în studiul anomaliilor celulelor în ceea ce privește forma, dimensiunea și numărul. Este un instrument foarte valoros pentru diagnosticul anumitor boli, cum ar fi leucemiile și anemiile.
În plus, este de o utilitate remarcabilă atunci când se caută paraziți în zonele hematologice (Plasmodium sp Da Trypanosome cruzi) sau histologic (Leishmanias sp).
În ceea ce privește citologia vaginală, această tehnică este deosebit de avantajoasă pentru observarea Trichomonas vaginalis. Aceasta este o constatare importantă, deoarece prezența sa simulează imagini de carcinom. in situ care apoi dispar când parazitul este îndepărtat.
A fost un instrument ideal pentru studiul probelor de spermă, deoarece oferă informații valoroase despre calitatea spermei.
Datele pe care le oferă au legătură în principal cu numărul și morfologia, precum și cu celulele concomitente care pot fi prezente și care sunt de o importanță vitală, cum ar fi celulele germinale, leucocitele și celulele epiteliale..
Cu această analiză este posibil să se descrie anomalii observate la spermatozoizi în cap, gât, piesa mijlocie și partea principală..
În plus, ele pot ajuta și la evidențierea cazurilor de hemospermie (prezența globulelor roșii în material seminal) și leucospermie sau piospermie (număr crescut de leucocite în material seminal).
Nimeni nu a comentat acest articol încă.