Hektoen agar sau agar enteric Hektoen este un mediu de cultură solid, selectiv și diferențial. A fost creat la Institutul Hektoen de King și Metzger pentru izolarea bacteriilor enteropatogene din genurile Shigella și Salmonella.
Mediul este compus din proteoză peptonă, extract de drojdie, săruri biliare, lactoză, zaharoză, salicină, tiosulfat de sodiu, clorură de sodiu, citrat de fier, citrat de amoniu, albastru de bromotimol, fucsină acidă și agar. Această formulare face posibilă diferențierea genurilor Shigella și Salmonella de restul bacteriilor capabile să crească în acest mediu..
Deși există și alte medii cu aceeași funcție ca agar Hektoen, are un avantaj mai mare în comparație cu alte medii, mai ales atunci când doriți să recuperați speciile Shigella..
Specia ambelor sexe produce probleme gastro-intestinale severe la om din cauza consumului de alimente contaminate; prin urmare, transmiterea este fecală - orală. De aceea, utilizarea agarului Hektoen este indicată în principal în analiza microbiologică a probelor de scaun și alimente..
Indice articol
Agarul Hektoen conține peptoni și extract de drojdie ca sursă de nutrienți, oferind elementele esențiale pentru dezvoltarea microbiană.
Cu toate acestea, are și săruri biliare care acționează prin inhibarea creșterii unor bacterii, în special Gram pozitive și unele Gram negative. Din acest motiv este considerat un mediu selectiv.
Pe de altă parte, agarul Hektoen este un mediu diferențial. Această proprietate este conferită de prezența carbohidraților fermentabili, cum ar fi lactoza, zaharoza și salicina, împreună cu sistemul de indicatori de pH, reprezentat de albastru de bromimol și fuchsină acidă..
Toate bacteriile capabile să crească pe acest mediu care nu aparțin genului Salmonella și Shigella vor dezvolta colonii de somon sau portocaliu, cu excepția genului Proteus. Acest lucru se datorează fermentării unuia sau mai multor carbohidrați prezenți, care acidifică mediul, ceea ce face ca indicatorul de pH să se schimbe..
La rândul său, genul Shigella și Salmonella nu sunt capabile să fermenteze niciunul dintre carbohidrații prezenți, folosind doar peptonele ca sursă de energie, care alcalinizează mediul și, prin urmare, coloniile lor sunt albastru-verzi..
Bacteriile capabile să formeze hidrogen sulfurat (gaz incolor) se pot distinge și în acest mediu. Tiosulfatul de sodiu acționează ca sursă de sulf în timp ce citratul de fier este agentul de dezvoltare. Ambii compuși fac posibilă formarea unui precipitat negru de sulfură de fier care arată reacția.
Precipitatul negru din centrul coloniei cu un halou transparent în jurul său dă un aspect de ochi de pește. Această caracteristică sugerează prezența genului Salmonella.
În cele din urmă, clorura de sodiu menține echilibrul osmotic, iar agarul asigură consistența solidă mediului..
Se cântăresc 76 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Agitați energic amestecul și apoi lăsați-l să se odihnească timp de 10 până la 15 minute. Poate fi încălzit și fiert, oferind mișcări rotative până la dizolvarea sa totală. Acest mediu nu este autoclavizat.
Când mediul atinge o temperatură de aproximativ 45 ° C, se toarnă un volum de 20 ml direct în cutii Petri sterile..
Agarul se lasă să se solidifice. În acel moment sunt gata de utilizare. Se recomandă utilizarea acestora imediat. Dacă acest lucru nu este posibil, acestea se păstrează la frigider până la utilizare..
Plăcile trebuie scoase din frigider în prealabil înainte de însămânțare pentru a le aduce la temperatura camerei.
PH-ul mediului trebuie să fie de 7,5 ± 0,2. Culoarea mediului deshidratat este violet, iar mediul preparat este verde maroniu.
Utilizarea agarului Hektoen este recomandată pentru a căuta bacterii din genul Shigella și Salmonella în probe de scaun și alimente..
Posibilitatea de a izola aceste bacterii este considerabil crescută dacă proba este îmbogățită anterior în bulionuri speciale, cum ar fi bulion de selenită, bulion de cistină selenită, bulion tetrationat etc..
Inoculul trebuie să fie puternic, iar însămânțarea se face prin striere. Plăcile sunt incubate la 37 ° C timp de 24 până la 48 de ore în aerobioză.
Se recomandă incubația timp de 48 de ore, deoarece caracteristicile coloniilor sunt mai clare pentru interpretarea și diferențierea lor în acest moment..
Pentru a efectua controlul calității pe acest mediu, se utilizează tulpini bacteriene certificate, cum ar fi: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 și Shigella sonnei ATCC 25931.
Rezultatele așteptate sunt următoarele: Salmonella typhimurium și Salmonella enteritidis ar trebui să dezvolte colonii albastru-verzui cu sau fără un centru negru. În timp ce speciile Shigella vor crește ca colonii verde-albăstrui.
Tulpini de Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 și Staphylococcus aureus ATCC 25923.
În aceste cazuri, caracteristicile observate sunt următoarele: E coli Da K. pneumoniae coloniile se vor dezvolta în această culoare de somon mediu până la portocaliu, cu un precipitat de aceeași culoare în jur. În timp ce Proteus va dezvolta colonii albastru-verzui cu sau fără un centru negru..
In timp ce S. aureus Da E. faecalis uneori trebuie inhibat E. faecalis reușește să crească ca colonii foarte mici, galbene.
Pe de altă parte, deoarece acest mediu nu este autoclavizat, este important să se evalueze sterilitatea mediului. Prin urmare, din fiecare lot pregătit, una până la două plăci neinoculate trebuie incubate la 37 ° C timp de 24 de ore în aerobioză..
Evident, nu se așteaptă niciun fel de creștere pe farfurie.
-Speciile Proteus se pot dezvolta în acest mediu și caracteristicile coloniilor lor pot fi confundate cu speciile Salmonella sau Shigella. Din acest motiv, orice colonie suspectă trebuie confirmată cu teste biochimice..
-Este necesar să se însoțească utilizarea acestui mediu cu alte agare mai puțin selective, deoarece dacă microorganismul căutat se găsește în concentrații scăzute, este posibil să nu se dezvolte în acest mediu..
-Nu supraîncălziți în timpul preparării, deoarece căldura excesivă modifică compoziția mediului.
-Coloniile de Salmonella care fermentează lactoza pot apărea neobișnuit și pot trece neobservate.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.