Sabouraud agar, cunoscut și sub numele de agar dextroză Sabouraud, este un mediu de cultură solid, special îmbogățit pentru izolarea și dezvoltarea ciupercilor, cum ar fi drojdiile, mucegaiurile și dermatofitele..
Prin urmare, acest mediu nu poate lipsi într-un laborator de microbiologie pentru a investiga prezența ciupercilor patogene sau oportuniste, fie din probe clinice, fie non-clinice. De asemenea, este ideal și pentru dezvoltarea bacteriilor filamentoase, cum ar fi Streptomyces și Nocardias. Utilizarea sa este foarte largă, deoarece poate fi utilizată în micologia umană, animală, vegetală și industrială.
Acest mediu a fost creat în 1896 de proeminentul dermatolog Raimond Sabouraud, care a devenit un specialist de renume mondial în tulburările scalpului, cauzate în principal de dermatofiți..
Crearea sa a fost atât de importantă încât a fost folosită de atunci și rămâne și astăzi, deși cu unele modificări.
Deși este specială pentru ciuperci, bacteriile pot crește în acest mediu, prin urmare, pentru probele cu flora mixtă, este necesară includerea de antibiotice în prepararea lor și astfel inhibă creșterea florei bacteriene care poate fi prezentă..
Alegerea antibioticului trebuie făcută cu atenție și ținând cont de tipul de ciupercă de recuperat, deoarece unele sunt inhibate în prezența anumitor substanțe.
Indice articol
Agarul dextroză Sabouraud este un mediu care în formularea sa inițială este slab selectiv, datorită pH-ului său acid de 5,6 ± 0,2, cu toate acestea bacteriile se pot dezvolta, în principal în incubații prelungite.
Mediul conține cazeină peptonă și digestie pancreatică a țesutului animal, care furnizează sursa de carbon și azot pentru creșterea microorganismelor..
De asemenea, conține o concentrație ridicată de glucoză, care acționează ca sursă de energie, promovând creșterea ciupercilor peste bacterii. Toate amestecate cu agar-agar, o componentă care îi conferă consistența potrivită..
Pe de altă parte, agarul dextroză Sabouraud poate fi selectiv dacă se adaugă antibiotice..
Cu antibiotice este util mai ales în probe de răni, ulcere deschise sau orice probă în care se suspectează o contaminare bacteriană mare.
-Agar Sabouraud cu cloramfenicol: ideal pentru recuperarea drojdiei și a ciupercilor filamentoase.
-Agar Sabouraud cu gentamicină și cloramfenicol: aproape toate ciupercile și drojdiile filamentoase cresc pe acest mediu și inhibă un număr mare de bacterii, inclusiv Enterobacteriaceae, Pseudomonas și Staphylococcus.
-Agar Sabouraud cu cicloheximidă: este util în special pentru probele din piele sau din căile respiratorii, atâta timp cât suspiciunea este de ciuperci dimorfe.
Cicloheximida trebuie utilizată cu precauție; Deși este utilizat pentru a inhiba creșterea ciupercilor și drojdiilor nepatogene sau de mediu care pot fi prezente ca contaminanți într-o probă, inhibă și creșterea unor ciuperci precum Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp și alte ciuperci oportuniste.
-Agar Sabouraud cu cloramfenicol plus cicloheximidă: utilizat în principal pentru izolarea dermatofiților și a ciupercilor dimorfe. Are dezavantajul că inhibă unele specii de ciuperci oportuniste precum Candida nu albicans, Aspergillus, zigomicete sau C.. neoformanilor.
-Agar Sabouraud cu cloramfenicol, streptomicină, penicilină G și cicloheximidă: este ideal pentru probele extrem de contaminate cu bacterii și ciuperci saprofite, dar are dezavantajul că inhibă creșterea Actinomyces și Nocardias, pe lângă ciupercile oportuniste menționate mai sus.
Dacă aveți ingredientele separat, acesta poate fi preparat după cum urmează:
Cântărește:
- 40 gr dextroză
- 10 g de peptonă
- 15 gr de agar-agar
- Măsurați 1000 ml de apă distilată
Toate ingredientele sunt amestecate, pH-ul este ajustat la 5,6. Solutele se dizolvă prin fierbere, 20 ml de mediu se distribuie în tuburi de 25 x 150 mm, fără jantă și de preferință cu un capac de bumbac..
Pot fi utilizate și alte dimensiuni ale tuburilor, în funcție de disponibilitate.
Acestea sunt autoclavizate timp de 10 minute la o atmosferă de presiune (121 ° C). Timpul de autoclavare nu trebuie depășit. La ieșirea din autoclavă, tuburile sunt înclinate cu ajutorul unui suport până se solidifică într-un vârf de flaut..
O altă modalitate este dizolvarea ingredientelor prin încălzire până la fierbere. În același balon, autoclavează 10 minute și apoi distribuie 20 ml în cutii Petri..
Dacă aveți un mediu de agar dextroză Sabouraud care conține deja toate ingredientele, continuați să cântăriți cantitatea specificată de compania comercială pentru un litru de apă. Restul pașilor sunt identici cu cei descriși mai sus.
Cântărește:
- 20 gr dextroză
- 10 g de peptonă
- 17 gr de agar-agar
- Măsurați 1000 ml de apă distilată
Toate ingredientele sunt amestecate, pH-ul este ajustat la 6,9. Procedați în același mod ca în cazul anterior.
Există case comerciale care oferă mediu cu toate ingredientele. În acest caz, cântăriți și pregătiți așa cum este descris pe inserție..
- Se cântăresc 500 mg bază cloramfenicol
- Măsurați 100 ml de etanol 95%
- Amesteca
Mediul de agar dextroză Sabouraud (Emmons) se prepară așa cum s-a descris anterior și suplimentar pentru fiecare litru de mediu se adaugă 10 ml soluție stoc de cloramfenicol înainte de autoclavare..
- Se cântăresc 5 g de cicloheximidă
- Măsurați 100 ml de acetonă
- Amesteca
Mediul de agar dextroză Sabouraud (Emmons) se prepară așa cum s-a descris anterior și suplimentar pentru fiecare litru de mediu se adaugă 10 ml soluție stoc de cicloheximidă înainte de autoclavare..
Mediul de agar dextroză Sabouraud (Emmons) se prepară așa cum s-a descris deja și suplimentar pentru fiecare litru de mediu se adaugă 10 ml soluție stoc de cloramfenicol și 10 ml soluție stoc cicloheximidă înainte de autoclavare..
20.000 până la 60.000 unități de penicilină pe litru de mediu.
30 mg de streptomicină pe litru de mediu.
Ambele trebuie încorporate după ce mediul a fost autoclavizat, ușor răcit (50-55 ° C).
0,04 g de neomicină pe litru de mediu.
0,04 g de gentamicină pe litru de mediu.
Pentru siguranță, este de preferat să se semene agar dextroză Sabouraud în tuburi în formă de pană (înclinate în cioc de flaut), mai degrabă decât în cutii Petri, pentru a evita dispersia și inhalarea sporilor.
Este important ca tuburile de agar Sabouraud să fie acoperite cu bumbac și nu cu un capac cu șurub, deoarece condițiile semi-anaerobe s-au dovedit a inhiba formarea de spori în unele tulpini, de exemplu Coccidioides immitis. De asemenea, majoritatea ciupercilor sunt aerobe..
În cazul utilizării capacului cu șurub, nu închideți ermetic.
Suportul pregătit trebuie să fie supus controlului calității pentru a verifica funcționarea corectă a acestuia. Pentru aceasta, sunt semănate anumite tulpini de control.
Pentru agar dextroză Sabouraud cu cloramfenicol, tulpini ATCC de Candida albicans, care trebuie să aibă o creștere excelentă. O altă placă este inoculată cu tulpini Escherichia coli, trebuie complet inhibat.
O placă neinoculată este, de asemenea, incubată în care nu ar trebui să crească microorganisme..
Pentru Sabouraud dextroză agar cu cloramfenicol și cicloheximidă, tulpini de Trichophyton mentagrophytes, ar trebui să se dezvolte bine. O altă placă este inoculată cu o tulpină de Aspergillus flavus, în care trebuie să existe puțină sau deloc creștere. În plus, o placă neinoculată este incubată pentru a-și demonstra sterilitatea..
Pentru Sabouraud dextroză agar cu cicloheximidă, tulpini de Candida albicans, Trichophyton rubrum sau Microsporum canis, care trebuie să prezinte o creștere bună.
La fel, o tulpină de Aspergillus flavus, prezentând o creștere mică sau deloc. În cele din urmă, incubați o placă neinoculată pentru controlul sterilității..
Agarul clasic de dextroză Sabouraud conține 4 grame de dextroză și este excelent ca mediu de izolare primar, deoarece arată morfologia caracteristică a fiecărei ciuperci..
De asemenea, este excelent pentru demonstrarea producției de pigmenți. Cu toate acestea, nu este cel mai potrivit mijloc de observare a sporulației..
De asemenea, nu este recomandat pentru creștere Blastomyces dermatitidis, care este inhibat de concentrația mare de glucoză prezentă.
Pe de altă parte, pentru cultivare trebuie luate în considerare anumite considerente.
Unele ciuperci cresc cel mai bine la temperatura camerei, cum ar fi mucegaiurile, altele cresc cu succes la 37 ° C, la fel ca unele drojdii, iar altele pot crește la ambele temperaturi (ciuperci dimorfe).
Din acest motiv, este uneori necesar să se utilizeze mai multe plăci de agar Sabouraud pentru aceeași probă, deoarece însămânțarea duplicat este adesea efectuată pentru a incuba o placă la temperatura camerei și alta la 37 ° C..
De exemplu, Sporothrix schenckii se însămânțează în două farfurii; una este incubată la temperatura camerei pentru a obține faza de mucegai și cealaltă este incubată la 37 ° C pentru a obține faza de drojdie, dar în aceasta din urmă este necesar să adăugați 5% sânge în mediu.
În alte cazuri, cum ar fi probele de micetom, sunt însămânțate două plăci de agar Sabouraud, una cu cloramfenicol și cealaltă cu cicloheximidă. Primul va permite creșterea agenților cauzali ai micetomului de origine fungică (Eumycetoma) și al doilea agenți cauzali ai micetomului de origine bacteriană, cum ar fi actinomicetoamele..
Agarul dextroză Sabouraud modificat de Emmons conține 2 grame de dextroză și nu este utilizat doar pentru izolare, ci și pentru sporulare și conservarea ciupercilor.
În acest mediu, dacă tulpini de Blastomyces dermatitidis.
Pentru a conserva culturile de ciuperci, acestea pot fi păstrate la frigider (2-8 ° C). Timpul de conservare poate varia între 2 și 8 săptămâni. După acest timp, trebuie să fie subcultivați pentru a repeta procesul..
Unele ciuperci se păstrează cel mai bine la temperatura camerei, cum ar fi Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum Da Microsporum audounii.
Menținerea tulpinii poate fi prelungită pentru a evita pleomorfismul dacă dextroza este complet eliminată din agar și dacă cantitatea de agar din mediu este redusă pentru a evita uscăciunea.
Pentru identificarea unor ciuperci filamentoase, este necesar să se efectueze microculturi folosind agar Sabouraud sau alte mijloace speciale pentru a observa structurile de reproducere sexuală și asexuată..
Este utilizat în principal pentru diagnosticarea bolilor fungice, în special a celor care afectează pielea și atașamentele acesteia (păr și unghii).
Probele pot fi secreții, exsudate, piele, păr, unghii, spută, LCR sau urină. Agenții patogeni în mod obișnuit izolați sunt dermatofiții, ciuperci care provoacă micoze subcutanate și sistemice..
Animalele sunt frecvent afectate de infecții fungice, prin urmare, agarul Sabouraud este la fel de util în micologia animalelor ca și la om..
De exemplu, dermatofiții pot afecta adesea animalele. Acesta este cazul Microsporum canis var distortum, Infectează frecvent câini, pisici, cai, porci și maimuțe. De asemenea, Microsporum gypseum infectează câini, pisici și animale.
Păsările precum găinile, cocoșii și găinile sunt afectate de Microsporum gallinae.
Alte ciuperci, precum Zymonema farciminosum, Ele sunt, de asemenea, cauza bolii la animale, în special cai, catâri și măgari, provocând inflamații semnificative în vasele limfatice..
Sporothrix schenkii și Histoplasma capsulatum afectează animalele domestice și oamenii.
Multe ciuperci patogene sau oportuniste se pot concentra la un moment dat într-un mediu dat, în special în sălile de operație și Unitățile de terapie intensivă (UCI) din clinici și spitale. Prin urmare, este necesar să se efectueze un control al acestora.
Alte spații vulnerabile sunt bibliotecile și clădirile vechi, care pot fi afectate de concentrația de ciuperci de mediu.
În studiile de mediu, agarul dextroză Sabouraud este utilizat pentru izolarea ciupercilor..
Agarul dextroză Sabouraud nu poate lipsi pentru studiul ciupercilor contaminante în producția de produse cosmetice, alimente, băuturi, piele, textile, printre altele..
Plantele suferă, de asemenea, de boli cauzate de ciuperci, care afectează diferite părți ale plantei, care pot chiar pune capăt recoltei, provocând pierderi mari în agricultură..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.