Agar de soia tripticazină sau Agar de soia Trypticase este un mediu de cultură solid, neselectiv și nutritiv. Este desemnat de literele TSA pentru acronimul său în engleză Trypticase Soy Agar. Este compus din tripteină, peptonă de soia, clorură de sodiu și agar-agar.
Datorită puterii sale nutritive ridicate, este ideală pentru cultivarea microorganismelor moderat solicitante și neexigente. Mediul fără suplimente suplimentare nu este recomandat pentru culturile primare, dar este foarte util pentru subcultivarea tulpinilor pure și menținerea acestora viabilă, printre alte utilizări..
De asemenea, acest agar servește ca bază pentru prepararea mediilor îmbogățite, cum ar fi agar din sânge, mai ales atunci când este necesar să se respecte modelele de hemoliză și să se monteze taxonii optoquin și bacitracină, necesari în diagnosticul de Streptococcus pneumoniae Da Streptococcus pyogenes respectiv.
Pe de altă parte, atunci când este combinat cu antibiotice, este util să se izoleze microorganismele anaerobe facultative și stricte de importanță clinică din probele cu floră mixtă..
În cele din urmă, compoziția agarului de soia tripticaseină și performanța acestuia îndeplinesc cerințele stabilite de diferitele farmacopee (europeană, japoneză și nord-americană)..
Indice articol
Pentru dezvoltarea corectă a bacteriilor, este necesară prezența unor surse de energie, cum ar fi aminoacizii, vitaminele, bazele purice și pirimidice..
În acest sens, tripteina și peptona din soia furnizează aceste substanțe nutritive microorganismelor, permițând astfel dezvoltarea lor deplină. Cu toate acestea, pentru bacteriile fastidioase este necesar să se completeze acest agar cu sânge defibrinat sau sânge încălzit pentru a crește îmbogățirea acestuia..
Pe de altă parte, dacă antibioticele sunt adăugate la mediu, acesta devine un mediu selectiv. De asemenea, puteți adăuga 0,6% din extract de drojdie pentru a favoriza izolarea speciilor din genul Listeria, în timp ce adăugarea de telurit de cistină Da sângele de miel este ideal pentru Corynebacterium diphteriae.
În cele din urmă, clorura de sodiu asigură echilibrul osmotic mediului, iar agarul asigură consistența solidă..
Pentru a prepara agar de soia tripticaseină, 40 g de mediu comercial deshidratat trebuie cântărite pe o cântare digitală. Se dizolvă într-un litru de apă distilată conținută într-un balon.
Amestecul este lăsat să se odihnească timp de 5 minute și apoi este dus la o sursă de căldură pentru a ajuta la dizolvarea mediului. Ar trebui amestecat frecvent și fiert timp de 1 sau 2 minute. Ulterior, mediul este sterilizat în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.
Se lasă să se răcească la 50 ° C și se distribuie în cutii Petri sterile. Lăsați să se solidifice, inversați, aranjați în plachete și păstrați-le în frigider.
PH-ul final al mediului trebuie să fie de 7,3 ± 0,2.
Trebuie remarcat faptul că culoarea mediului de cultură deshidratat este de culoare bej deschis și trebuie păstrată între 10 și 35 ° C, într-un loc uscat..
La rândul său, agarul preparat este de culoare chihlimbar deschis. Plăcile preparate trebuie păstrate la frigider (2 până la 8 ° C) până la utilizare..
Plăcile trebuie să atingă temperatura camerei înainte de utilizare.
Agarul de sânge este preparat prin adăugarea a 5% sânge defibrinat la răcirea agarului de soia triptic la 50 ° C. Amestecul se omogenizează prin rotire cu mișcări ușoare.
Se servește în vase Petri sterile. Culoarea mijlocie trebuie să fie roșu vișiniu.
Pentru a prepara agar de sânge pe bază de TSA, procedați la fel ca procedurile descrise deja, dar la ieșirea din autoclavă, lăsați-l să se odihnească până când temperatura mediului este de aproximativ 56 până la 70 ° C. În acel moment, sângele este plasat și amestecat până când mediul devine maroniu..
Se servește în vase Petri sterile. Culoarea mediului este maro ciocolată.
Procedura de preparare a agarului este aceeași cu cea descrisă pentru farfurii, cu diferența că, în loc să servească mediul pe cutii Petri, este distribuit între 10 și 12 ml în tuburi cu capac de bakelită înainte de sterilizare..
Ulterior, tuburile sunt autoclavizate la 121 ° C timp de 15 minute. La plecare, se apleacă cu ajutorul unui suport și îi lasă să se solidifice.
Pene pregătite sunt semănate în funcție de suprafață și servesc la menținerea viabilă a anumitor microorganisme care nu necesită o perioadă de timp specificată..
Agar de soia tripticazină este utilizat în următoarele cazuri:
-Ca bază pentru prepararea clasicului agar de sânge care este utilizat în mod obișnuit în majoritatea laboratoarelor.
-Izolarea bacteriilor fastidioase.
-Observarea tiparului de hemoliză.
-Rularea testelor de diagnostic.
-Ca bază pentru prepararea agarului de sânge special pentru Corynebacterium diphteriae, cu telurit de cistină Da sânge de miel.
-Ca bază pentru prepararea agarului din sânge de miel, plus kanamicină-vancomicină pentru creșterea anaerobilor, în special Bacteroides sp.
-Pentru întreținerea tulpinilor nepretențioase (Bacterioteca).
-Numărul microbian aerob în studiul limitei microbiene a probelor de apă, mediu, alimente și cosmetice.
Probele pot fi semănate direct pe suprafața agarului de soia tripticazină suplimentată cu sânge sau alți aditivi. Este semănat de epuizare.
În timp ce, plăcile de agar din soia tripticaseină fără aditivi sunt utilizate în general pentru subcultura tulpinilor microbiene (bacterii sau drojdie)..
Pentru a verifica sterilitatea diferitelor medii preparate cu agar pe bază de soia tripticaseină, se recomandă să faceți următoarele: din fiecare lot pregătit, 1 sau 2 plăci sau tuburi neinoculate trebuie incubate la 37 ° C timp de 24 de ore pentru a demonstra sterilitatea lor. În toate cazurile, trebuie să rămână fără creștere.
Dacă se constată contaminare, întregul lot trebuie aruncat..
Următoarele tulpini bacteriene pot fi utilizate pentru a studia buna funcționare a agarului de soia tripticaseină: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 și Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Tulpinile sunt însămânțate și incubate aerob la 37 ° C timp de 24 de ore.
În toate cazurile, creșterea trebuie să fie satisfăcătoare.
Pot fi folosite și ciuperci precum Complex Candida albicans ATCC 10231 și Aspergillus niger ATCC 16404. Se așteaptă o creștere bună pentru ambele tulpini.
Următoarele tulpini pot fi utilizate pentru a verifica buna funcționare a agarului de sânge preparat cu această bază: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 și Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
Acestea sunt însămânțate și incubate la 37 ° C în microaerofilicitate timp de 24 de ore..
În toate cazurile, creșterea trebuie să fie satisfăcătoare, ținând cont de faptul că în S. pyogenes trebuie observată beta-hemoliza (halo limpede în jurul coloniei) și la ambele tulpini de S. pneumoniae trebuie observată hemoliza alfa (halou verzui în jurul coloniilor).
Nimeni nu a comentat acest articol încă.