albastru de lactofenol sau albastru de bumbac este un preparat cu proprietăți simple de colorare. Este utilizat în laboratoarele clinice pentru a colora în principal structurile fungice, cum ar fi hifele, tuburile germinale și sporii..
Ajută la diagnosticul prezumtiv sau preliminar al anumitor ciuperci, cu toate acestea, este întotdeauna recomandabil să consolidați diagnosticul cu teste mai specifice, cum ar fi teste biochimice sau serologice..
Albastrul de lactofenol este alcătuit din acid lactic, albastru de anilină, glicerină, fenol și apă deionizată. Poate fi preparat în laborator sau poate fi achiziționat gata de utilizare. Odată pregătit, acesta este gata de utilizare, în niciun caz nu trebuie diluat, deoarece această acțiune va da rezultate teribile.
Concentrația componentelor sale îl face ideal pentru colorarea structurilor fungice, deoarece fenolul elimină microbiota bacteriană însoțitoare, în timp ce acidul lactic generează un film protector în jurul structurii fungice. În cele din urmă, albastrul de anilină are o afinitate de a adera la structurile ciupercii..
Indice articol
Cu albastru de lactofenol, se efectuează o simplă colorare a structurilor fungice ale unei anumite culturi micologice. Se numește simplu deoarece folosește un singur colorant.
Albastrul de lactofenol, în afară de colorare, acționează și ca un clarificator al probei, datorită acțiunii comune a acidului lactic și a fenolului, în plus, fenolul se comportă ca un mordant și, în același timp, previne liza microorganismului prin inhibarea hidroliticului enzime care pot fi prezente.
În timp ce acidul lactic păstrează morfologia structurilor ciupercii.
Pe de altă parte, albastrul de anilină are proprietatea de a adera sau de a se lega de structurile care conțin chitină. Structurile se colorează în albastru deschis.
Trebuie remarcat faptul că peretele celular al microorganismelor fungice, în special al mucegaiurilor, conține chitină, motiv pentru care acest colorant este ideal pentru colorarea acestor microorganisme..
Soluția albastră de lactofenol este un colorant ușor tulbure, ușor tulbure, apos, puternic acid, de culoare albastru deschis. Rămâne stabil dacă este depozitat între 15 ° C și 25 ° C. Flaconul trebuie ținut bine închis. Este iritant și coroziv pentru piele și mucoase.
Formula pentru a prepara un litru de albastru de lactofenol este următoarea:
-250 g / L acid lactic
-1,0 g / L albastru de anilină sau albastru de metil
-500 g / L glicerină
-250 g / L fenol
-250 ml apă deionizată sau distilată.
Fenolul este dizolvat în apa încălzită anterior. Se adaugă acid lactic și glicerină și se amestecă foarte bine. În cele din urmă, albastrul de anilină se dizolvă. Se amestecă din nou și este gata de utilizare.
Porțiile pentru prepararea a 80 ml soluție albastră de lactofenol sunt:
-20 g cristale de fenol
-20 ml acid lactic
-40 ml de glicerină sau glicerol
-20 ml apă distilată.
Este folosit pentru colorarea structurilor fungice și, prin caracteristicile morfologice observate la nivel microscopic, pentru a putea face un diagnostic prezumtiv al ciupercii.
- Se ia o cultură pură a ciupercii din care doriți să observați structurile sale.
- Este de preferat să lucrați într-o hota cu flux laminar sau sub brichetă, folosind o mască și mănuși, deoarece este necesar să respectați standardele de biosecuritate, deoarece majoritatea matrițelor sunt ușor de răspândit în mediu și, prin urmare, reprezintă un pericol pentru operator.
- O picătură de albastru de lactofenol este plasată pe o lamă..
- Un mic pătrat de bandă adezivă de bună calitate este tăiat și aderat foarte atent la capătul mânerului de platină, deja sterilizat și rece..
- Mânerul de platină este apropiat de partea cea mai superficială a coloniei fungice și cultura este atinsă foarte atent, exact unde se află banda adezivă..
- Apoi este dus la lamelă și plasat puțin peste picătura de albastru de lactofenol, având grijă ca banda să fie perfect extinsă și lubrifiată cu vopseaua. Mânerul de platină este îndepărtat foarte delicat.
- O altă picătură de albastru de lactofenol este plasată pe bandă și o lamă de acoperire deasupra. Nu aplicați prea multă presiune pentru a evita distrugerea structurilor ciupercii, deoarece acestea sunt extrem de fragile. Vopseaua trebuie lăsată să acționeze timp de aproximativ 3 până la 4 minute.
- După acest timp, preparatul este gata pentru a fi observat la microscop cu mărire 10X sau 40X. Dacă este necesară observarea la 100X, utilizați ulei de imersie.
- Structurile ciupercii, în general, sunt colorate în albastru, cu excepția ciupercilor dematiacee care își vor păstra culoarea maronie caracteristică acestui tip de ciupercă..
Dacă este necesar să se studieze o probă biologică directă, cum ar fi spută, puroi, exsudate, secreții, printre altele, acestea trebuie să aibă o procedură prealabilă pentru decontaminarea probei. Pentru aceasta se folosește soluție NaOH.
În cazul probelor de păr, acestea pot fi vopsite direct.
Mai multe fire afectate (10 în total) sunt luate din leziunile prezumtive de tinea capită (zone alopecice) și așezate pe o lamă (3 până la 4 fire de păr pe lamă). Câteva picături de albastru de lactofenol sunt așezate deasupra și acoperite imediat cu o lamă de acoperire..
Prindeți diapozitivul cu forceps și încălziți ușor peste arzător. Pentru a face acest lucru, faceți 3 până la 4 treceri rapide prin flacără. Observați microscopul la 40X și căutați spori în afara sau în interiorul părului (ectothrix sau respectiv endothrix). Dacă este necesar, adăugați ulei de scufundare și observați la 100X.
După incubarea culturii prezumtive a Candida albicans în serul uman timp de 2 până la 4 ore la 37 ° C, se ia o porțiune din soluție și se colorează cu albastru de lactofenol. Preparatul este observat la microscop la 40X. Tubul germinal este prezent, iar blastosporii se colorează în albastru strălucitor.
Asociația Națională de Protecție împotriva Incendiilor (NFPA) stabilește fișa cu date de securitate pentru substanțele chimice în ceea ce privește riscul pe care îl reprezintă în funcție de diferite aspecte, acestea sunt simbolizate printr-un romb colorat și un număr cuprins între 0 și 4.
Pericolele pentru sănătate sunt identificate în albastru, inflamabilitatea în roșu, instabilitatea sau reactivitatea în galben și orice pericol special în alb..
Riscul pentru sănătate pe care îl prezintă albastrul de lactofenol conform NFPA este de nivelul 3. Aceasta înseamnă că substanța este extrem de periculoasă atunci când este ingerată sau în contact direct cu pielea sau membranele mucoase..
Este o substanță foarte corozivă și iritantă.
În contact cu pielea și mucoasele provoacă arsuri severe.
Dacă este ingerat, poate provoca cefalee, confuzie, letargie, inconștiență, stop respirator și chiar moarte..
Conform NFPA, albastrul de lactofenol este evaluat la nivelul 1 pentru inflamabilitate. Aceasta înseamnă că arde numai dacă este încălzit la peste 94 ° C..
Listat sub NFPA la nivelul 0 (zero) pentru reactivitate. Aceasta înseamnă că nu prezintă niciun risc de reactivitate, adică este o substanță chimic stabilă..
Nu oferă pericole speciale suplimentare.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.