tampon fosfat, BPS sau soluție salină tampon fosfat Este o soluție tampon și izotonică, a cărei funcție este de a menține pH-ul și presiunea osmotică cât mai aproape de mediul biologic natural (fiziologic). Acronimul PBS înseamnă soluție salină tamponată cu fosfat..
PH-ul și osmolaritatea sunt două aspecte foarte importante care trebuie controlate în anumite protocoale de laborator. În cazul pH-ului, este esențial ca acesta să fie controlat, în special în reacțiile biochimice, deoarece acestea pot varia sau nu pot fi efectuate dacă reactanții sunt la un pH inadecvat.
Între timp, controlul osmolarității este esențial mai ales atunci când se lucrează cu celule vii, deoarece membranele plasmatice ale celulelor reacționează în funcție de concentrația de substanțe dizolvate în care se găsesc..
Dacă celulele sunt transferate într-un mediu hipertonic, acestea se vor deshidrata, deoarece gradientul de apă va fi transportat către partea în care există o concentrație mai mare de substanțe dizolvate. Dacă, pe de altă parte, celulele sunt plasate într-un mediu hipoton, celulele vor absorbi lichidul până când vor fi lizate..
De aceea tamponul PBS este utilizat pentru protocoalele de laborator care necesită întreținerea celulelor. in vitro, în acest fel celulele nu vor fi deteriorate.
PBS este alcătuit dintr-o combinație de săruri, cum ar fi clorură de sodiu, fosfat de sodiu, clorură de potasiu și fosfat de potasiu. Compoziția PBS poate varia în funcție de protocol..
Indice articol
Practic, funcția tamponului fosfat salin este de a menține un pH fiziologic constant împreună cu o concentrație de electroliți similară cu cea găsită în interiorul corpului..
În acest mediu, celulele sunt capabile să rămână stabile, deoarece condițiile fiziologice sunt simulate cât mai mult posibil..
Alți compuși pot fi adăugați la formularea originală PBS dacă este necesar, de exemplu adăugarea EDTA la tampon este utilă pentru spălarea globulelor roșii în testul de incompatibilitate încrucișată..
EDTA împiedică fracția complementului C1 prezentă în ser să fie clivată și lizată la celulele roșii din sânge, adică evită rezultatele false de incompatibilitate. În plus, EDTA ajută la disocierea celulelor.
Cantitatea de săruri care trebuie cântărită pentru prepararea soluției saline tamponate cu fosfat PBS va depinde de cantitatea care trebuie preparată:
Pentru un litru de soluție:
Cântărește:
80,6 g NaCI,
2,2 g KCl,
11,5 g NaDouăHPO4,
2,0 g KHDouăHPO4
Așezați sărurile grele într-un pahar, adăugați suficientă apă (80%) și amestecați pe placa de agitare cu bara magnetică până când sărurile sunt dizolvate..
Filtrează pentru a elimina particulele nedizolvate. Utilizați filtre cu pori de 0,45 µm. Autoclavează și distribuie aseptic în hota cu flux laminar în borcane de sticlă cu capace.
Soluția 10X (concentrată) nu ajustează pH-ul. Reglarea se face odată diluată la concentrația 1X tampon PBS, (diluare 1:10).
1X PBS poate fi preparat direct, cântărind cantitățile corespunzătoare din fiecare sare sau poate fi preparat prin diluarea soluției stoc (1:10) cu apă distilată sterilă..
-Pentru a prepara direct un litru de soluție salină tamponată cu fosfat 1X PBS, cântăriți:
8,06 g NaCI,
0,22 g KCl,
1,15 g NaDouăHPO4,
0,20 g KHDouăHPO4
Procedați conform explicațiilor pentru soluția concentrată. Ulterior, pH-ul trebuie ajustat. Pentru a face acest lucru, măsurați pH-ul și, în funcție de rezultat, utilizați acid (HCI) sau bază (NaOH) pentru a scădea sau crește respectiv pH-ul, după cum este necesar, până când acesta este de 7,4.
Acidul sau baza se adaugă picătură cu picătură în timp ce se monitorizează valoarea pH-ului soluției folosind un pH-metru. Filtrează, autoclavează și distribuie aseptic în tuburi conice sau borcane, după cum este necesar.
-Pentru a prepara 1X PBS din soluția stoc 10X:
Faceți o diluție 1:10. De exemplu, pentru a prepara 1 litru de 1X PBS, măsurați 100 ml soluție stoc și adăugați 700 ml apă distilată sterilă. Reglați pH-ul și umpleți cantitatea de apă până la 1000 ml.
Tamponul PBS preparat este incolor și transparent.
PBS zilnic poate fi păstrat la temperatura camerei, iar restul la frigider.
Pentru 100 ml de HCL 1 molar (acid clorhidric).
Măsurați 91 mL de apă distilată și puneți-o într-un pahar de 250 mL.
Măsurați 8,62 ml de HCI concentrat și adăugați-l încet în paharul care conține apa (nu o faceți niciodată invers). Luați măsurile relevante de biosecuritate atunci când manipulați acizi puternici (substanță foarte corozivă).
Se amestecă timp de 5 minute, de preferință folosind o placă de agitare cu o bară magnetică în interiorul paharului. Se transferă într-un balon de 100 ml și se completează până la 100 ml cu HDouăSau distilat.
Pentru 100 ml NaOH (hidroxid de sodiu) 10 molare.
Măsurați 40 mL de apă distilată și puneți-o într-un pahar de 250 mL. Măsurați 40 g de NaOH și adăugați-l în apă. Se amestecă folosind o placă de amestecare cu o bară magnetică în interiorul paharului.
Se transferă într-un balon volumetric de 100 ml și se completează până la semn cu apă distilată. Respectați reglementările privind securitatea biologică, deoarece această reacție este exotermă (eliberează energie sub formă de căldură).
Dacă doriți să preparați alte cantități de soluție salină de fosfat, puteți consulta următorul tabel:
Utilizat în principal în biologie celulară, imunologie, imunohistochimie, bacteriologie, virologie și laboratoare de cercetare.
Este ideal pentru spălarea celulelor prin centrifugare (celule roșii din sânge), spălări monostrat de celule, în tehnici de elipsometrie spectroscopică, în cuantificarea biofilmelor bacteriene, în întreținerea culturilor de celule pentru viruși, ca soluție de spălare în tehnica de imunofluorescență indirectă. Și în tehnici de caracterizare a anticorpilor monoclonali.
De asemenea, este utilizat pentru transportul celulelor sau țesuturilor, ca diluant pentru numărarea celulelor, pentru prepararea enzimelor celulare (tripsina), ca diluant pentru metoda de deshidratare a biomoleculelor și pentru prepararea altor reactivi..
Pe de altă parte, Martin și colab. În 2006 au demonstrat că PBS este util în laboratoarele de știință criminalistică, în special în recuperarea spermei din frotiurile vaginale sau în recuperarea celulelor vaginale din frotiurile penisului. În acest fel se poate stabili dacă a existat o relație sexuală.
-Unele tampoane PBS conțin o substanță numită azidă de sodiu ca conservant. Acest compus poate genera substanțe explozive dacă intră în contact cu plumbul sau cuprul. Din acest motiv, trebuie să se acorde o atenție deosebită la eliminarea acestui reactiv pe canal. Dacă se aruncă în acest fel, trebuie adăugată multă apă pentru a se dilua cât mai mult posibil..
-Zincul nu trebuie adăugat în tamponul fosfat, deoarece provoacă precipitarea unor săruri.
-Wangen și colab. În 2018 au stabilit că utilizarea PBS nu era adecvată pentru spălarea celulelor primare de leucemie mieloidă acută (LMA) extrase din sângele periferic, datorită faptului că multe celule se pierd prin liză, cu o scădere mare a materialului proteic..
Prin urmare, au stabilit că celulele AML primare nu trebuie spălate cu PBS după depozitare în azot lichid..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.