bulion tetrationat sau bulion TT este un mediu de cultură lichid selectiv pentru îmbogățirea și recuperarea tulpinilor din genul Salmonella. A fost creat de Müeller și ulterior modificat de Kauffmann, motiv pentru care există cei care îl numesc bulion Müeller-Kauffmann.
Mediul original conținea peptonă proteozică, carbonat de calciu și tiosulfat de sodiu. Kauffmann i-a adăugat săruri biliare și a creat o altă modalitate cu verde strălucitor. Aceste substanțe inhibă creșterea coliformelor, lăsând mediul liber pentru dezvoltarea bacteriilor patogene, în acest caz Salmonella.
Modificarea a fost foarte reușită, deoarece a crescut semnificativ sensibilitatea mediului. Din acest motiv, este util în prezent pentru căutarea Salmonellas în orice tip de probă, dar mai ales pentru scaune și alimente solide sau lichide..
Pregătirea sa constă din două faze; mediul comercial este o bază pentru prepararea bulionului de tetrationat și, ulterior, astfel încât tetrationatul să poată fi format, se adaugă o soluție de iod iodat pentru a completa mediul.
Asociația Americană de Sănătate Publică (APHA) recomandă utilizarea bulionului tetrationat suplimentat cu verde strălucitor pentru îmbogățirea probelor pentru Salmonella, deoarece este mai selectiv decât bulionul tetrationat și bulionul selenit..
În general, bulionul tetrationat este ideal atunci când prezența bacteriilor din genul Salmonella este suspectată în cantități mici sau când sunt abuzate de expunerea la substanțe inhibitoare sau de procese industriale care le minimalizează viabilitatea..
Indice articol
Peptonele prezente corespund digestiei pancreatice a cazeinei și digestiei peptice a țesutului animal. Acestea furnizează sursa de carbon, azot și nutrienți generali pentru creșterea bacteriilor..
La rândul său, tiosulfatul de sodiu reacționează cu soluția iodată pentru a forma tetrationat. Aceasta inhibă creșterea coliformelor și favorizează dezvoltarea bacteriilor care conțin enzima tetration reductază, printre care se numără genul Salmonella, dar și Proteus.
Sărurile biliare acționează, de asemenea, ca o substanță inhibitoare pentru majoritatea bacteriilor Gram pozitive și pentru unele bacterii Gram negative (coliforme)..
Carbonatul de calciu absoarbe substanțele toxice generate de descompunerea tetrationatului, care formează acid sulfuric. În acest sens, carbonatul de calciu neutralizează aciditatea, menținând pH-ul mediului stabil..
În cazul modului verde strălucitor, această substanță crește puterea selectivă a bulionului tetrationat prin inhibarea altor microorganisme decât genul Salmonella..
Cântărește:
Iodura de potasiu este dizolvată în aproximativ 5 ml de apă distilată sterilă, apoi iodul se adaugă puțin câte puțin în timp ce amestecul este încălzit. După ce este complet dizolvat, se completează până la semn cu apă distilată sterilă până la atingerea unui volum final de 20 ml..
Se cântăresc 46 de grame de mediu deshidratat și se suspendă în 1 litru de apă distilată sterilă. Se amestecă și se încălzește până se dizolvă complet, poate aduce la fierbere doar câteva minute. Nu faceți autoclavă. Baza mediului este lăsată să se răcească la aproximativ 45 ° C și în acel moment se adaugă 20 ml de soluție iodată..
După adăugarea soluției de iodură în mediu, aceasta trebuie utilizată imediat. Dacă nu doriți să utilizați întregul amestec, procedați după cum urmează:
10 ml de mediu de bază sunt distribuiți în tuburi și numai celor care trebuie inoculați cu probe se adaugă 0,2 ml de soluție iodată..
Cei care nu vor fi folosiți pot fi păstrați în frigider, totuși, deoarece mediul nu este sterilizat, idealul este să pregătiți cantitatea exactă care este necesară..
Culoarea mediului înainte de adăugarea soluției de iod de iod este alb lăptos cu un precipitat alb și după adăugare este maro cu un precipitat dens. Precipitatul observat este normal și corespunde carbonatului de calciu care nu se dizolvă. PH-ul final al mediului este de 8,4 ± 0,2.
Pentru a prepara bulionul tetrationat verde strălucitor, se efectuează toate etapele descrise mai sus, dar în plus, la amestec se vor adăuga 10 ml de soluție verde strălucitor preparată la 0,1%..
Această soluție este preparată după cum urmează:
Se cântăresc 0,1 g de verde strălucitor și se suspendă în 100 ml de apă distilată. Se încălzește la fierbere pentru a se dizolva complet. A se păstra în sticlă de chihlimbar.
Pentru probele de scaun (cultura scaunului) protocolul este după cum urmează:
Inoculați 1 g de scaun solid sau 1 ml de scaun lichid într-un tub cu 10 ml de bulion tetrationat gata de utilizare. Se agită energic și se incubează aerob la 43 ° C timp de 6-24 ore.
Ulterior, luați o alicotă de 10 până la 20 pl de bulion și subcultură într-un mediu selectiv pentru Salmonella, cum ar fi agar SS, agar XLD, agar verde strălucitor, agar enteric Hektoen, printre altele..
În paralel, mediul selectiv pentru Salmonella trebuie inoculat cu proba directă (fecale) fără îmbogățire. Pentru probele de tampon rectal, descărcați materialul colectat în tub și procedați așa cum este descris mai sus..
Pentru probele de alimente, cântăriți 10 g de alimente solide sau 10 ml de alimente lichide și inoculați o sticlă cu 100 ml de bulion tetrationat gata de utilizare. Procedați în același mod ca cel descris mai sus, dar incubați la 37 ° C.
După cum se poate observa, relația dintre eșantion și bulion va fi întotdeauna 1:10.
Tulpinile de control cunoscute pot fi utilizate pentru a testa mediul de cultură. Cele mai utilizate sunt tulpinile certificate ATCC.
Tulpinile de utilizat sunt Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 și Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Se așteaptă o dezvoltare excelentă pentru tulpinile de Salmonella, în timp ce Escherichia coli poate avea o dezvoltare slabă sau regulată, iar tulpinile Gram pozitive (Enterococcus și Staphylococcus) sunt parțial sau total inhibate.
-Deoarece acest mediu nu inhibă creșterea Proteus, unele laboratoare plasează 40 mg / L de novobiocină pentru a evita dezvoltarea acestei tulpini microbiene. Antibioticul trebuie adăugat înainte de soluția de iod de iod..
-După prepararea mediului, inclusiv soluția de iod de iod, nu trebuie să treacă mai mult de 2 ore pentru a fi inoculat..
-La distribuirea mediului în tuburi, amestecul trebuie omogenizat continuu pentru a resuspenda precipitatul format..
-În probele mai puțin contaminate, bulionul tetrationat este incubat la 35-37 ° C, iar în probele foarte contaminate se recomandă incubarea la 43 ° C..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.