jumătate SIM este un agar semisolid și diferențial, special conceput pentru a ajuta la identificarea unor bacterii, în principal din familia Enterobacteriaceae. Este compus din tripteină, peptonă, sulfat de fier, sulfat de amoniu, tiosulfat de sodiu și agar..
Acest mediu permite executarea a trei teste importante: producerea de sulfură de hidrogen (HDouăS), formarea indolului și motilitatea, de unde vine acronimul SIM. Datorită marii sale utilități, nu poate lipsi într-un laborator de bacteriologie.
Spre deosebire de alte medii, trebuie să fie semi-solid pentru ca capacitatea de mișcare a unor bacterii să fie detectabilă. În acest sens, acest test funcționează foarte bine pentru Enterobacteriaceae, dar nu și în tijele Gram negative care nu fermentează, unde se preferă utilizarea altor metode, cum ar fi picătura suspendată..
Mediul SIM permite să distingem anumite proprietăți specifice care caracterizează unele bacterii în raport cu altele. De exemplu Escherichia coli se distinge prin a fi HDouăS (-), Indol (+) și motilitate (+), în timp ce Proteus mirabilis este HDouăS (+), indol (-), motilitate (+).
Indice articol
Este un mediu de cultură care este considerat diferențial, deoarece utilizarea sa face distincția între microorganismele capabile să producă sulfură de hidrogen de cele care nu; De asemenea, îi evidențiază pe cei care formează indol din triptofan de cei care nu îl formează și, în cele din urmă, diferențiază bacteriile mobile de cele imobile..
La fel ca orice mediu de cultură, are elemente care furnizează substanțele nutritive necesare, astfel încât microorganismele neexigente să se poată dezvolta. Aceste elemente sunt reprezentate de peptones și triptein.
Dezvoltarea microorganismului în mediu este esențială pentru a putea observa prezența sau absența caracteristicilor pe care acest mediu le evaluează..
Litera S a acronimului SIM se referă la producerea de hidrogen sulfurat (HDouăS). Bacteriile capabile să formeze hidrogen sulfurat vor prelua sulful din tiosulfatul de sodiu.
Odată ce HDouăS-gaz incolor-, acesta reacționează cu sarea de fier prezentă în mediu, formând sulfură feroasă, clar vizibilă (precipitat negru). Bacteriile care nu formează HDouăDa, lăsați mijlocul culorii originale (bej).
Prezența precipitatului negru poate împiedica interpretarea motilității. Cu toate acestea, se știe că majoritatea Enterobacteriaceae producătoare de HDouăS sunt motilitate pozitivă, cum ar fi Salmonella, Proteus și Citrobacter. În plus, precipitatul negru care acoperă aproape întregul mediu, sugerează motilitate pozitivă.
A doua literă a acronimului SIM este „I”, care reprezintă formarea indolului.
În acest sens, tripteina, pe lângă faptul că este o sursă de nutrienți, îndeplinește o altă funcție fundamentală. Această peptonă este bogată într-un aminoacid numit triptofan, prin urmare, poate prezenta bacteriile care produc triptofanază.
Această enzimă este responsabilă de scindarea aminoacidului triptofan, cu formarea consecventă de indol (substanță incoloră), acid piruvic și amoniu.
De aceea, pentru a demonstra această reacție, este necesar să adăugați o substanță revelatoare (reactivul Ehrlich sau reactivul Kovac). Oricare reacționează cu indol, formând o substanță în formă de inel roșu-fucsia pe suprafața agarului. Dacă apare inelul fucsia, testul indol este interpretat ca pozitiv.
Bacteriile care nu posedă această enzimă nu vor forma inelul și se interpretează ca un test de indol negativ.
Este important de reținut că testul indol ar trebui să fie ultimul care trebuie interpretat, deoarece odată ce reactivul este adăugat, mediul devine tulbure, ceea ce face dificilă vizualizarea motilității..
În cele din urmă, litera „M” a cuvântului SIM înseamnă motilitate. Pentru a putea evalua motilitatea, acest mediu este strategic semi-solid, deoarece această caracteristică este esențială pentru a putea observa dacă există sau nu mișcare bacteriană. Bacteriile care au flageli sunt cele care dau acest test pozitiv.
Un test pozitiv va fi evident atunci când se observă turbiditate, atât în inoculul inițial, cât și în jurul acestuia. În timp ce, bacteriile nemotile se dezvoltă numai pe calea inoculului inițial.
Se cântăresc 30 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Amestecul se lasă să stea 5 minute și apoi se încălzește până la fierbere, amestecând frecvent până se dizolvă complet..
Distribuiți amestecul în eprubete cu capace de bumbac și autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute. Scoateți raftul tubului din autoclavă și lăsați să se solidifice în poziție verticală, astfel încât mediul să aibă forma unui bloc.
Pentru conservare se păstrează la frigider până la utilizare. Mediul preparat trebuie să aibă un pH final de 7,3 ± 0,2.
În momentul inoculării mediului, acesta trebuie să fie la temperatura camerei. Culoarea de mijloc este bej.
Măsurați 150 ml alcool amilic sau izoamilic sau butilic. (Folosiți unul dintre cele trei menționate).
Se dizolvă 10 g de p-dimetilaminobenzaldehidă. Apoi adăugați încet 50 ml de acid clorhidric concentrat.
Reactivul gata de utilizare este incolor sau galben deschis. Ar trebui păstrat într-o sticlă de chihlimbar și păstrat la frigider. Nu utilizați dacă ia o culoare maro închis; care indică faptul că este deteriorat. Acest reactiv este preferat atunci când vine vorba de Enterobacteriaceae.
Se cântăresc 2 g de p-dimetilaminobenzaldehidă și se dizolvă în 190 ml alcool etilic absolut și se amestecă încet cu 40 ml acid clorhidric concentrat. Păstrați reactivul Kovac în același mod. Reactivul Ehrlich este utilizat mai mult pentru bacteriile anaerobe și nefermentante.
Mediul SIM este foarte utilizat în laboratoarele de bacteriologie. Are avantajul că trei caracteristici esențiale în identificarea Enterobacteriaceae pot fi observate în același tub..
Modul corect de a semăna acest mediu este utilizarea acului, cu care se ia o porțiune din colonia pură care urmează a fi studiată și introdusă vertical în centrul mediului. Ar trebui efectuată o singură lovitură. Puncția nu trebuie să ajungă în partea de jos a tubului, ceea ce este corect este să acoperiți doar două treimi din adâncime.
Nu se recomandă repetarea inoculului, deoarece acest lucru poate duce la interpretări false ale motilității pozitive. Mediul inoculat este incubat aerob la 37 ° C timp de 24 de ore..
După acest timp, se observă dacă a existat sau nu producție de HDouăS și motilitatea este citită. În cele din urmă, indolul este dezvăluit, adăugând 3 până la 4 picături de reactiv Ehrlich sau Kovac, amestecați ușor și interpretați.
Ca control al sterilității, unul sau două tuburi sunt incubate fără inoculare într-un cuptor la 37 ° C timp de 24 de ore. Se așteaptă ca după acest timp să nu existe creșterea sau schimbarea culorii.
Ca control al calității, pot fi utilizate tulpini cunoscute certificate, cum ar fi: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.
Rezultatele așteptate sunt: Escherichia coli HDouăS negativ, indol și motilitate pozitivă, Enterobacter aerogenes doar motilitate pozitivă, Salmonella typhimurium HDouăS și motilitate pozitivă, cu indol negativ. Proteus vulgaris toate pozitive, în timp ce Klebsiella pneumoniae Da Shigella sonnei toate negative.
-Unele tulpini de Morganella morganii, Printre alte tulpini, pot produce un pigment maroniu în acest mediu datorită producției de melanină, acest lucru nu trebuie confundat cu precipitatul de sulfură de fier. La profesioniștii fără experiență, această situație poate genera falsuri pozitive în interpretarea testului H.DouăS.
-Bacteriile aerobe stricte vor crește doar pe suprafața tubului, ceea ce face dificilă interpretarea motilității.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.