Trandafirul Bengal Este un test de laborator bazat pe o reacție antigen-anticorp pentru diagnosticarea brucelozei. Tehnica permite detectarea anticorpilor specifici împotriva bacteriilor Brucella abortus în probe de ser uman. Rezultatul poate fi raportat calitativ sau semicantitativ.
Forma calitativă exprimă dacă pacientul este pozitiv sau negativ pentru test, adică dacă există sau nu anticorpi. Între timp, raportul semicantitativ este raportat în UI / ml și indică cantitatea aproximativă de anticorpi prezenți. Trebuie remarcat faptul că anticorpii vor fi produși numai dacă pacientul a fost în contact cu microorganismul.
Datorită marii sale simplități, sensibilitate ridicată și specificitate, este una dintre tehnicile de seroaglutinare cele mai utilizate în medicină ca test inițial pentru diagnosticul acestei boli..
Unii cercetători au comparat eficacitatea testului Rose Bengal cu alte tehnici, cum ar fi seroaglutinarea (antigene febrile) și au observat că, deși există o corelație bună, au văzut cazuri izolate în care testul antigenului febril a fost negativ și Rose de Positive flare.
Diferența obținută s-a datorat faptului că acești pacienți au avut o subclasă de anticorpi IgG împotriva Brucella abortus cu o capacitate de legare mai bună la pH acid, de aceea ar putea reacționa cu reactivul Rose Bengal, dar nu cu cel al antigenelor febrile.
În acest sens, au sugerat ca reactivii tehnicii antigenului febril să fie modificați la un pH acid, astfel încât să poată detecta acest tip de cazuri..
Indice articol
Reactivul Rose Bengal constă dintr-o suspensie antigenică. Este alcătuit din tulpina S99 de Brucella abortus, diluat într-un tampon lactat acid (pH 3,6), plus fenol și colorantul Rose Bengal.
Prin urmare, în eșantion, se caută anticorpi anti-Brucella, dacă aceștia sunt prezenți, vor reacționa cu antigenul reactiv și se va observa o reacție de aglutinare vizibilă macroscopic. Testul detectează fie anticorpi IgM, fie anticorpi IgG.
Aceasta înseamnă că poate detecta boala atât în stadiul său acut în care predomină anticorpii IgM, fie în stadiul său cronic în care predomină anticorpii IgG..
Acest lucru reprezintă un avantaj, deoarece crește sensibilitatea testului, dar în același timp este un dezavantaj, deoarece nu discriminează între o etapă și alta, deoarece reacția cu anticorpii IgM și IgG este identică.
Testul trebuie efectuat întotdeauna împreună cu un control negativ și un control pozitiv. Controlul negativ conține ser animal fără anticorpi, iar controlul pozitiv conține ser de origine animală cu 50 UI / ml de anticorpi anti-Brucella..
Bruceloză este o boală gravă care tinde să fie cronică și periculoasă, de aceea este foarte important ca aceasta să fie diagnosticată devreme. Este o zoonoză și oamenii pot fi infectați prin contactul direct cu materialul contaminat, cei mai vulnerabili oameni fiind medicii veterinari și deținătorii de animale.
Infecția poate apărea și prin consumul de carne crudă infectată, printre alte forme de contagiune.
Această boală atacă local sau sistemic. Forma sistemică este cea mai gravă, deoarece pot fi afectate diferite organe, inclusiv sistemul endotelial al reticulului (ficat, splină, măduvă osoasă), piele (celulită și limfadenopatie), sistemul respirator (pneumonie), sistemul musculo-scheletic (artrită, sacroiliită și spondilită) ), printre alții.
Testul Rose Bengal este o tehnică foarte utilă pentru efectuarea unui screening inițial, deoarece este foarte ieftin, ușor de utilizat și cu o mare specificitate și sensibilitate..
Cazurile de fals negative și fals pozitive sunt foarte rare și pot apărea la persoanele cu titruri foarte mici de anticorpi (< 25 UI/ml) o extremadamente altos (>1000 UI / ml), respectiv.
-Trusa Rose Bengal
-Placă de aglutinare pe fundal alb
-Pipetă de 50 µl
-Rotator (opțional)
-Vortex
Kituri comerciale Rose Bengal vin cu reactivi gata de utilizat.
-Temperează reactivii înainte de a începe lucrul.
-Plăcile de aglutinare au cercuri desenate, fiecare pentru un eșantion diferit. Folosiți 3 cercuri, primul pentru controlul negativ, al doilea pentru eșantion și al treilea pentru controlul pozitiv.
-Așezați o picătură sau 50 µl din controale și eșantion în cercul corespunzător.
-Se amestecă reactivul Rose Bengal folosind un vortex. Așezați o picătură lângă cele plasate anterior.
-Se amestecă cu scobitori din lemn (folosiți câte unul pentru fiecare specimen sau control). Faceți mișcări circulare și răspândiți în așa fel încât să acopere întregul cerc.
-Așezați placa pe un rotator automat la 80-100 RPM sau rotiți manual timp de 4 minute. Citiți dovada la sfârșitul acestui timp.
-Verificați dacă comenzile au fost oferite conform așteptărilor. Comparați reacția probei de testare cu controalele. Se raportează ca pozitiv dacă se observă aglutinare și ca negativ dacă nu există aglutinare.
Un test pozitiv indică faptul că pacientul are o cantitate egală sau mai mare de 25 UI / ml de anticorpi anti-Brucella.
Dacă în reacția calitativă eșantionul este puternic pozitiv, acesta poate fi semicuantificat. Pentru aceasta, se fac diluții seriale duble ale probei cu soluție salină fiziologică. Procedura descrisă mai sus se efectuează cu fiecare diluare..
De asemenea, este interpretat prin observarea aglutinării macroscopic. Rezultatul va fi titlul celei mai mari diluări în care s-a observat un rezultat pozitiv.
Pentru a calcula valoarea aproximativă a anticorpilor anti-Brucella, se folosește următoarea formulă:
25 UI / ml x titru de reacție = UI / ml
De exemplu, dacă un pacient din testul semicantitativ dă dovadă de pozitiv la diluția ½, ¼ și 1/8 și începe să fie negativ de la diluția 1/16 încoace, aceasta înseamnă că pacientul are un titru de 8.
Aplicarea formulei:
25 UI / ml x 8 = 200 UI / ml
-Trusele au o dată de expirare și trebuie respectată. Nu trebuie utilizat dacă reactivul este expirat.
-În timpul utilizării, asigurați-vă că reactivul nu conține particule solide, deoarece acesta este un semn de deteriorare..
-A se păstra între 2 și 8 ° C.
-Nu înghețați, acest act dăunează iremediabil reactivului.
-Rulați întotdeauna testul împreună cu controalele negative și pozitive.
-Tehnica tolerează probele de ser cu un anumit grad de lipemie și hemoliză, totuși nu este recomandabil să se utilizeze seruri exagerat lipemice și hemolizate, ambele condiții modificând rezultatele testului..
-Încălziți întotdeauna reactivii la temperatura camerei înainte de a începe analiza..
-Nu interpretați reacțiile care durează mai mult decât timpul recomandat, deoarece acest lucru generează raportul falsurilor pozitive, deoarece după un anumit timp reactivul precipită, simulând o reacție pozitivă.
-Tehnica este 100% sensibilă și are o specificitate de 98%.
-După o semi-cuantificare de 1000 UI / ml există posibilitatea de a observa un efect prozonă (fals negativ din cauza excesului de anticorpi comparativ cu cantitatea de antigeni).
Nimeni nu a comentat acest articol încă.