safranin Este un colorant meriquinoid, numit pentru că are în structura sa chimică 2 inele benzenoide și 2 inele quinoide, acestea din urmă fiind cele care asigură culoarea roșie.
Se mai numește dimetil safranină sau roșu bazic 2 în forma sa scurtă, deoarece denumirea sa științifică este 3,7-diamino-2,8-dimetil-5-fenil-fenaziniumchloro dimetil safranină și formula chimică este CdouăzeciH19N4 Cl.
Există o variantă numită trimetil-safranină, dar nu există nicio diferență semnificativă între cele două substanțe.
Safranina este un colorant monocromatic și, în funcție de caracteristicile formulei chimice, este o substanță încărcată pozitiv. Prin urmare, are o afinitate pentru structurile încărcate negativ. Aceste structuri vor fi colorate în roșu.
Această proprietate îi conferă aplicabilitate în multe tehnici histologice pentru colorarea diverselor structuri celulare, atât în organismele eucariote, cât și în cele procariote..
Safranina este utilizată ca colorant de contrast în tehnici importante și bine cunoscute pentru utilizarea de rutină în bacteriologie. Aceste tehnici sunt: colorarea Gram-Hucker, colorarea Schaeffer Fulton pentru spori sau colorarea capsulelor bacteriene, printre altele..
Indice articol
Culoarea șofranului (un condiment obținut din stigmatele florii de Crocus sativus) a fost inspirația pentru a denumi această colorare. De la termenul șofran provine numele de safranin. Acest lucru se datorează asemănării mari dintre culoarea șofranului și colorarea pe care o oferă acest colorant..
Safranina se obține sub formă de cristale sau sub formă de pulbere, ambele prezentări fiind solubile în apă. Vopseaua safraninei este inodoră. Pete structuri roșii. Structurile care atrag vopseaua safraninei se numesc safranofile..
Structural safranina este complexă, are două inele benzenoide la capete și în centru sunt situate cele două inele quinoide în care se găsește cationul N.+. Centrul structurii este sistemul însărcinat cu furnizarea culorii. Datorită acestei caracteristici, acest colorant este clasificat în categoria II..
Safranina este utilizată pentru colorarea diferitelor structuri. Evidențiază în special celulele Kulchitsky prezente în tractul gastro-intestinal, numite și celule enterocromafine.
Este capabil să coloreze microorganismele aparținând familiei Rickettsiaceae. De asemenea, este utilizat în diverse tehnici, cum ar fi metoda Koster, o modificare utilizată pentru colorarea bacteriilor din gen. Brucella.
Pe de altă parte, safranina este utilizată în tehnica de colorare a sporilor Schaeffer Fulton și în colorarea Gram-Hucker. În ambele tehnici, safranina funcționează ca un colorant de contrast.
În primul, sporii iau culoarea verde de malachit, iar restul structurilor sunt roșii de safranină. În al doilea rând, bacteriile Gram negative pierd culoarea cristalului violet în etapa de decolorare, prin urmare safranina este cea care colorează roșu bacteriile Gram negative.
În plus, safranina este utilizată în bacteriologie pentru a prepara mediul de agar Brucella cu o diluție de safranină 1: 5000. Acest mediu servește la diferențierea speciei Brucella suis din restul speciilor. Brucella melitensis Da Brucella abortus cresc în acest mediu dar B. suis este inhibat.
În domeniul agroindustrial, safranina a fost utilizată la 2,25% și diluată la 1:10 pentru colorarea probelor de tulpină din planta de trestie de zahăr.
Această plantă este frecvent afectată de bacterii Leifsonia xyli subsp. xyli, care dăunează xilemului plantei. Tulpinile colorate sunt evaluate pentru a determina funcția vaselor xilemice..
Un frotiu de sânge sau țesut este plasat într-o soluție tampon (tampon fosfat pH 7,6). Se lasă să se usuce spontan și apoi acoperit cu albastru de metilen timp de 3 minute și contracolorat cu safranină. Rickettsiae sunt colorate în albastru, contrastând cu fundalul roșu.
Se face un frotiu și se aprinde în brichetă pentru fixare. Ulterior, este acoperit cu un amestec de 2 părți de safranină apoasă saturată cu 3 părți de 1 mol / L soluție KOH, timp de 1 minut. Se spală cu apă distilată și se colorează cu 1% albastru de metilen carbolic..
Dacă proba conține bacterii din gen Brucella acestea vor apărea portocalii pe un fundal albastru.
Un amestec de suspensie bacteriană se face cu cerneală India și i se adaugă safranină. La microscop, un halo roșiatic va fi observat în jurul fiecărei capsule bacteriene cu fundal negru..
Se face un frotiu cu suspensia bacteriană. Apoi se fixează la căldură. Este acoperit cu 5% verde malachit, frecvent în flăcări până când sunt emise vapori. Procesul se repetă timp de 6-10 minute. În cele din urmă, se spală cu apă și se colorează cu 0,5% safranină timp de 30 de secunde. Bacilii se colorează roșu și sporii verzi.
Un frotiu se face cu suspensie bacteriană și este fixat la căldură. Acoperiți diapozitivul cu cristal violet timp de 1 minut. Apoi lugol este plasat ca o soluție mordantă timp de 1 minut. Ulterior, este decolorat cu alcool acetonic și, în cele din urmă, colorat cu safranină timp de 30 de secunde..
Bacteriile Gram pozitive colorează violet albăstrui și bacteriile Gram negative roșii.
Unele laboratoare au încetat să mai folosească tehnica Gram-Hucker pentru a adopta tehnica modificată Gram-Kopeloff. În acesta din urmă, safranina este înlocuită cu fucsina de bază. Acest lucru se datorează faptului că safranina colorează slab speciile din genuri Legionella, Campylobacter Da Brucella.
Secțiunile de țesut din tractul gastro-intestinal sunt colorate cu clorură de argint. Se decolorează apoi cu tiosulfat de sodiu și, în final, se colorează cu safranină.
Celulele Kulchitsky se disting prin prezența granulelor maronii negricioase..
Deoarece safranina are o sarcină pozitivă, se leagă foarte bine de grupările carboxil și sulfat ale glicozaminoglicanilor. Acestea fac parte din proteoglicanii care alcătuiesc cartilajul articular. În acest sens, atunci când se colorează cu safranină O, este posibil să se identifice dacă există sau nu pierderea cartilajului..
Pierderea țesutului cartilajului poate fi măsurată folosind scara Mankin sau numită și scara osteoartritei..
Tehnica este explicată mai jos: secțiunea histologică este scufundată într-o tavă cu soluție de hematoxilină de fier a Weigert, apoi trecută prin alcool acid și spălată cu apă.
Continuați procesul de colorare prin scufundarea lamelei în verde rapid, este spălat cu acid acetic și acum este scufundat în safranină O. Pentru a termina procesul, este deshidratat folosind alcooli la diferite concentrații în ordine crescătoare. Ultima etapă necesită xilen sau xilol pentru clarificarea probei.
Diapozitivele sunt condiționate cu balsam canadian sau similar pentru a fi observate la microscop..
Cu această tehnică, nucleele sunt colorate în negru, osul verde și cartilajul în care proteoglicanii se găsesc roșii.
Pérez și colab., În 2003, au propus o tehnică simplă și ieftină pentru vopsirea macroalgelor. Probele sunt preparate în secțiuni histologice de parafină. Secțiunile sunt fixate cu 1% glicerină, permițându-le să se usuce complet. Se pune apoi în xilol pentru a îndepărta parafina.
Secțiunea este rehidratată trecând-o printr-o serie de tăvi care conțin etanol în diferite grade de concentrație (ordinea descrescătoare), timp de 2 minute în fiecare..
Ulterior, este colorat timp de 5 minute cu un amestec 3: 1 de safranină 1% cu albastru de toluidină 1%, ambele preparate cu etanol 50%. La amestec se adaugă trei picături de acid picric, care acționează ca un mordant..
Apoi se deshidratează trecând din nou prin tăvile de alcool, dar de data aceasta în mod ascendent. În cele din urmă, este clătit cu xilol și proba este preparată cu balsam din Canada pentru a fi observată..
Din fericire, safranina este un colorant care nu prezintă un pericol pentru cei care o manipulează. Este un colorant inofensiv, nu este cancerigen și nu este inflamabil..
Contactul direct cu pielea sau membranele mucoase poate provoca o ușoară roșeață în zonă, fără complicații majore. Pentru aceasta, se recomandă spălarea zonei afectate cu multă apă.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.