Agar Baird Parker Este un mediu de cultură solid, selectiv și diferențial. A fost creat în 1962 pentru detectarea și numărarea stafilococilor coagulazici pozitivi (Staphylococcus aureus).
Este compus din hidrolizat de cazeină pancreatică, extract de carne, extract de drojdie, clorură de litiu, glicină, piruvat de sodiu, telurit de potasiu, agar și emulsie de gălbenuș de ou..
Baird Parker Agar se bazează pe abilitatea S. aureus pentru a reduce teluritul și a produce lecitinază. Ambele proprietăți generează o colonie cu caracteristici specifice pentru această specie. Prin urmare, este extrem de eficient în detectarea acestui microorganism..
Coloniile tipice din S. aureus Sunt negre sau gri închis, cu o margine incoloră și un halou deschis care le înconjoară, diferențându-le de alte microorganisme. Acest agent patogen poate fi găsit în probe clinice, ape, produse cosmetice și alimente crude sau gătite..
Diagnosticul sau detectarea acestuia este de cea mai mare importanță, datorită varietății de patologii pe care le produce, precum intoxicații alimentare, sindrom de piele opărită, sindrom de șoc toxic, abcese, meningită, septicemie, endocardită, printre altele..
Indice articol
Hidrolizat de cazeină pancreatică, extract de carne și extract de drojdie sunt sursele de nutrienți, vitamine și minerale necesare dezvoltării microbiene generale, în timp ce piruvatul și glicina sunt compuși care promovează creșterea specifică a Staphylococcus aureus.
Agarul Baird Parker este selectiv deoarece conține substanțe care inhibă creșterea florei însoțitoare, promovând în același timp dezvoltarea S. aureus. Compușii inhibitori sunt clorura de litiu și teluritul de potasiu..
Acest mediu face posibilă diferențierea S. aureus din restul stafilococilor negativi coagulazici. S. aureus are capacitatea de a reduce teluritul la telur negru metalic liber, formând colonii negre sau gri închis.
La fel, gălbenușul de ou oferă substraturi pentru a demonstra prezența enzimei lecitinază și lipază.. S. aureus este lecitinază pozitivă și, prin urmare, un halo clar va fi observat în jurul coloniei, indicând faptul că lecitina a fost hidrolizată.
În acest sens, apariția pe acest agar a coloniilor strălucitoare negru sau gri închis cu un halou ușor în jurul lor indică prezența S. aureus.
Dacă se formează o zonă de precipitații, aceasta indică activitatea lipazei. Unele tulpini de S. aureus sunt lipazice pozitive și altele negative.
În cazul în care S. aureus Dacă lipaza este pozitivă, se va observa o zonă opacă în jurul coloniei negre sau cenușii închise, iar apoi un halou ușor datorită acțiunii lecitinazei.
Colonii de bacterii, altele decât S. aureus capabil să crească în acest mediu va dezvolta colonii incolore sau maronii, fără halo înconjurător.
Coloniile negre atipice pot fi, de asemenea, văzute cu sau fără o margine incoloră, dar fără un halou ușor. Aceste colonii nu trebuie luate în considerare, nu corespund S. aureus.
Luați un ou de pui proaspăt, spălați-l bine și puneți-l în alcool 70% timp de 2 până la 3 ore. Oul este apoi deschis aseptic și albușul este separat cu grijă de gălbenuș. Ulterior, se iau 50 ml de gălbenuș și se amestecă cu 50 ml de soluție fiziologică sterilă..
Unele case comerciale vând 1% telurit de potasiu gata de utilizare. Se adaugă la mediu înainte ca acesta să se solidifice.
Pentru a prepara această soluție în laborator, se cântăresc și se dizolvă 1,0 g de telurit de potasiu într-o parte a apei. Ulterior, cantitatea de apă este finalizată până la 100 ml. Soluția trebuie sterilizată prin metoda de filtrare.
Se cântăresc 60 g de mediu deshidratat și se dizolvă în 940 ml de apă distilată. Lăsați amestecul să se odihnească timp de aproximativ 5 până la 10 minute.
Aplicați căldura amestecând frecvent mediul pentru a îmbunătăți procesul de dizolvare. Se lasă să fiarbă un minut. Sterilizați în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.
Se lasă să stea până ajunge la temperatura de 45 ° C și se adaugă 50 ml de emulsie de gălbenuș de ou și 10 ml de telurit 1%. Se amestecă bine și se toarnă 15-20 ml pe vasele Petri sterile..
Se lasă să se solidifice, se aranjează inversat în plachete și se păstrează la frigider până la utilizare.
PH-ul final al mediului preparat trebuie să fie de 6,8 ± 0,2.
Înainte de însămânțarea unei probe, așteptați ca placa să atingă temperatura camerei. Semănați plăcile prin dungă sau însămânțarea la suprafață cu spatulă Drigalski.
Culoarea mediului deshidratat este cafeniu deschis, iar culoarea mediului preparat este chihlimbar deschis.
Probele clinice sunt semănate direct prin descărcarea unei părți a materialului la un capăt al plăcii, iar de acolo este striat de epuizare. Se incubează timp de 24 până la 48 de ore la 35-37 ° C.
Se cântăresc 10 g din proba alimentară și se omogenizează în 90 ml apă peptonică 0,1%, de acolo se prepară diluții, dacă este necesar. Se inoculează plăcile în triplicat cu 0,3 ml de soluții preparate și se însămânțează la suprafață cu o spatulă Drigalski. Se incubează timp de 24 până la 48 de ore la 35-37 ° C.
Această metodologie permite numărarea coloniilor tipice obținute și este ideală atunci când prezența S. aureus peste 10 UFC pe gr / ml de probă.
Dacă suma de S. aureus Este mic sau există o mulțime de floră însoțitoare, se recomandă îmbogățirea probei în bulion de soia tripticază cu 10% NaCI și 1% piruvat de sodiu. Acest lucru va favoriza creșterea S. aureus și va inhiba dezvoltarea florei însoțitoare. Tuburile tulburi sunt însămânțate pe agar Baird Parker..
Într-un sistem de filtrare sub vid sterilizat, se filtrează 100 ml de apă de studiu, iar ulterior membrana microporoasă de 0,4 microni este îndepărtată cu o pensă sterilă și plasată pe o placă Baird Parker. Se incubează timp de 24 până la 48 de ore la 35-37 ° C. Această tehnică permite numărarea coloniilor tipice de S. aureus.
Tulpinile cunoscute pot fi utilizate pentru a evalua calitatea Agarului Baird Parker, cum ar fi Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Stafilococ epidermid ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 sau Proteus mirabilis ATCC 43071.
În cazul tulpinilor de S. aureus Se știe că ATCC reduce telluritul și sunt lipase și lecitinază pozitive. Prin urmare, trebuie să existe o dezvoltare satisfăcătoare și să crească colonii convexe cu un centru negru și o margine incoloră, cu un halou opac și un halou ușor exterior..
La rândul său, S. epidermidis se așteaptă o dezvoltare slabă pe acest mediu, cu colonii maronii-cenușii până la negre, fără halou deschis.
Pentru a E coli Da P. mirabilis este de așteptat să fie total sau parțial inhibat. În caz de creștere, coloniile brune se vor dezvolta fără zonă opacă sau halo ușor.
-Mediul nu trebuie încălzit după adăugarea de telurit și gălbenușul de ou.
-Prepararea emulsiei de gălbenuș de ou și adăugarea acesteia în mijloc este un pas foarte vulnerabil pentru contaminare. Trebuie avută grijă.
-Dacă există colonii tipice de S. aureus trebuie coroborat prin montarea unui test de coagulază pe tulpina menționată.
-Dacă există rezultate îndoielnice cu coagulaza, ar trebui montate alte teste de confirmare.
-Aveți grijă să nu confundați prezența coloniilor tipice de S. aureus cu colonii negre atipice.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.