agar de ciocolată Este un mediu de cultură solid, îmbogățit, neselectiv și nediferențial. Este utilizat în principal pentru izolarea microorganismelor solicitante din punct de vedere nutrițional, deși în ea poate crește orice tip de bacterie..
De aceea, utilitatea sa crește în special în însămânțarea probelor care sunt în mod normal sterile, cum ar fi LCR și fluidul articular. Deși este inclus și în mijloacele alese pentru însămânțarea probelor polimicrobiene, dar în aceste cazuri este necesară adăugarea de antibiotice care inhibă flora concomitentă..
Acest mediu are o culoare maro caracteristică foarte asemănătoare cu ciocolata, de unde și numele său. Preparatul este foarte asemănător cu cel al agarului din sânge, doar că în acest caz sângele trebuie încălzit pentru ca celulele roșii din sânge să se descompună..
Prepararea sa, ca și agarul de sânge, este foarte delicată, deoarece este ușor de contaminat. Din acest motiv, multe laboratoare preferă să achiziționeze acest mediu deja pregătit de companii comerciale care îi garantează calitatea..
Indice articol
Acest mediu este compus dintr-o bază de agar bogată în nutrienți și sânge încălzit. Hemoliza celulelor roșii din sânge asigură factorul X (hemin) și factorul V (NAD), necesare pentru dezvoltarea unor microorganisme, precum genul Haemophilus. De asemenea, este foarte util pentru izolare Neisserias sp.
La fel ca agarul de sânge, diferite medii pot fi utilizate ca agar de bază în funcție de nevoie. Printre mijloacele de informare utilizate se numără infuzia de inimă cerebrală și agar de soia tripticază, deși cele mai recomandate sunt agar Columbia, Müeller Hinton, agar GC și agar Thayer Martin..
Unele variante de agar de ciocolată includ un supliment fortificat disponibil în comerț numit Isovitalex sau Polivitex..
Aceste suplimente conțin vitamina B12, L-glutamină, adenină, clorhidrat de guanină, acid p-aminobenzoic, nicotinamidă adenină dinucleotidă (NAD), tiamin pirofosfat, azotat feric, clorhidrat de tiamină, clorhidrat de cisteină, L-cistină și glucoză.
Este important să rețineți că agarul de ciocolată este mai îmbogățit decât agarul din sânge, dar nu permite observarea modelelor de hemoliză..
Acest mediu conține digestie pancreatică de cazeină și inimă, digestie peptică de carne, clorură de sodiu, agar, extract de drojdie și amidon de porumb. De asemenea, este bogat în vitamine, minerale și aminoacizi esențiali.
Această bază de sânge încălzită este ideală pentru izolarea bacteriilor din genul Neisseria. Pe de altă parte, dacă un supliment pentru Brucella este adăugat suplimentar la mediu, microorganismul menționat mai sus poate fi izolat. Rezultatele sunt îmbunătățite folosind sânge de cal.
Acest mediu conține peptoni, amidon de porumb, tampoane monobazice și dibazice, clorură de sodiu și agar..
Majoritatea prezentărilor de agar de ciocolată preparate comercial vin cu această bază și nu conțin sânge încălzit, ci în schimb un amestec sintetic de hemină și un supliment chimic de factori de creștere, vitamine, minerale, aminoacizi, factor V și glucoză..
Se utilizează pentru efectuarea testelor de sensibilitate antimicrobiană a microorganismelor fastidioase, cum ar fi Streptococcus pneumoniae folosind 5% sânge de berbec încălzit.
Este, de asemenea, utilizat pentru izolarea primară a Neisserias și Haemophilus, dar în cazul particular al izolării Haemophilus Este preferată utilizarea sângelui de cal, deoarece este o sursă bogată de factori X și V.
Pe de altă parte, dacă proba care urmează să fie semănată provine dintr-o zonă nesterilă, se recomandă adăugarea de antibiotice pentru a inhiba flora normală a zonei..
Exemplu pentru probele respiratorii în care se suspectează prezența bacteriilor din gen Haemophilus Bacitracina este utilizată pentru a inhiba creșterea Stafilococ, micrococ, streptococ și Neisserias saprofite.
În cazul probelor de șanse genitale, acolo unde este suspectat Haemophilus ducreyi, A fost utilizat cu succes un agar de ciocolată preparat după cum urmează: Agar Müeller-Hinton cu 5% sânge de cal ciocolatat, 1% îmbogățire cu Isovitalex și 3 µg / ml vancomicină.
Acest mediu este special pentru izolarea Neisseria gonorrhoeae. Trebuie să conțină antibiotice pentru a inhiba flora însoțitoare. Sângele de miel este folosit.
Ar trebui să vedeți indicațiile pentru prepararea agarului de bază de utilizat. Se găsesc pe spatele recipientului mediului deshidratat. În general, ele descriu cât trebuie să cântăriți pentru a pregăti un litru de mediu de cultură.
În laborator, cantitatea exactă necesară poate fi pregătită, poate fi mai mult sau mai puțin de un litru.
Pentru a calcula volumul dorit se utilizează o regulă de trei. Exemplu:
Dacă pentru 1 litru este necesar să cântăriți 40 g și laboratorul necesită 800 ml, se spune:
1000 ml -40 gr
800 ml - X
Formula va fi după cum urmează:
X = 32 gr (cantitate de cântărit pentru 800 ml).
Cantitatea necesară este cântărită și plasată într-un balon cu apă.
Se încălzește la foc moderat și se amestecă ușor cu mișcări rotative până când mediul deshidratat se dizolvă complet, lăsându-l să fiarbă 1 minut..
Balonul este plasat în autoclavă pentru a steriliza mediul la 121 ° C timp de 20 de minute..
La ieșirea din autoclavă, lăsați-o să se odihnească până când temperatura mediului este de aproximativ 56 până la 70 ° C pentru a plasa sângele și amestecați până când mediul devine maroniu..
Dacă adăugați suplimente, acesta este momentul să faceți acest lucru. Ulterior amestecați și serviți 20 ml la fiecare cutie Petri sterilă.
Întreaga procedură trebuie făcută într-o hotă cu flux laminar sau în jurul arzătorului Bunsen..
Lăsați să stea până se solidifică și depozitați inversat în frigider.
Mediul de bază este preparat așa cum este descris mai sus, hemoglobina deshidratată obținută comercial este dizolvată și sterilizată în autoclavă..
Ambele soluții se lasă să se răcească la 50 ° C, sunt îmbinate și se adaugă suplimentul. Se amestecă în condiții aseptice și apoi se servește în cutii Petri sterile..
Este important ca sângele să fie plasat la temperatura indicată, deoarece este cel ideal pentru a liza celulele roșii din sânge și, în același timp, pentru a menține factorul V, care este sensibil la temperatură..
Nu ar trebui să rămână bule pe suprafața agarului. Din fiecare lot de 100 de plăci, una sau două plăci ar trebui să fie incubate în cuptor la 37 ° C timp de 24 de ore pentru a verifica sterilitatea acestora..
Pentru cele mai bune rezultate, agar de ciocolată trebuie utilizat la scurt timp după preparare..
Tulpinile bacteriene de control trebuie păstrate în laborator pentru a evalua eficacitatea mediului proaspăt pentru creșterea principalelor microorganisme fastidioase de importanță clinică..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.