Agar de citrat Simmons Este un mediu solid utilizat ca test biochimic pentru identificarea microorganismelor, în special a bacililor Gram negativi. Mediul original a fost creat de Koser în 1923.
Mediul citrat al lui Koser a constat dintr-un bulion care conține fosfat de sodiu, fosfat de amoniu, fosfat monopotassic, sulfat de magneziu și citrat de sodiu..
După cum se poate observa, singura sursă de carbon din mediu este citratul, iar azotul este fosfatul de amoniu, omițând proteinele și carbohidrații ca sursă a acestor elemente, acestea fiind prezente în mod obișnuit în alte medii..
Prin urmare, bacteriile inoculate în acest mediu se pot reproduce numai dacă sunt capabile să preia carbonul din citrat. Testul a fost pozitiv dacă a existat turbiditate în mediu, totuși a avut dezavantajul că ar putea apărea turbiditate nespecifică.
Această problemă a fost rezolvată de Simmons adăugând albastru de bromimol și agar la formula originală a lui Koser. Deși principiul este același, este interpretat diferit.
Indice articol
Unele bacterii au capacitatea de a supraviețui în absența fermentației sau a producției de acid lactic, fiind nevoie să obțină energie prin utilizarea altor substraturi. În acest test, singura sursă de carbon oferită este citratul.
Bacteriile care sunt capabile să supraviețuiască în aceste condiții metabolizează rapid citratul pe o cale alternativă la cea tradițională, utilizând ciclul acidului tricarboxilic sau ciclul de fermentare a citratului..
Catabolismul citratului de către bacterii implică un mecanism enzimatic fără intervenția coenzimei A. Această enzimă este cunoscută sub numele de citricază (citrat oxaloacetat liat) sau citrat desmolază. Reacția necesită prezența unui cation divalent, care în acest caz este furnizat de magneziu.
Reacția generează oxaloacetat și piruvat, care dau naștere la acizi organici în mijlocul unui pH alcalin format prin utilizarea sursei de azot. Acești acizi organici sunt folosiți ca sursă de carbon care generează carbonați și bicarbonați, alcalinizând în continuare mediul..
Mediul citrat Simmons trebuie inoculat ușor în coadă de pește folosind o buclă dreaptă sau ac și incubat timp de 24 de ore la 35-37 ° C. După timp, rezultatele sunt observate.
Sămânțarea se face numai pe suprafața agarului. Nu înțepați.
Dacă mediul rămâne culoarea originală (verde) și nu există o creștere vizibilă, testul este negativ, dar dacă mediul devine albastru, indică prezența produselor alcaline, care este detectată de indicatorul pH-ului. În acest caz, testul este pozitiv.
Acest lucru se întâmplă deoarece, dacă bacteria folosește carbonul din citrat, este capabilă să preia și azotul din fosfatul de amoniu cu care eliberează amoniac, alcalinizând mediul..
Pe de altă parte, dacă se observă creșterea bacteriilor în mediu, dar nu există schimbări de culoare, testul trebuie de asemenea considerat pozitiv, deoarece, dacă există creștere, înseamnă că bacteriile au fost capabile să utilizeze citratul ca sursă de carbon , chiar dacă nu există nicio modificare a pH-ului în acest moment (uneori poate dura ceva timp).
Dacă există vreo îndoială în interpretarea culorii finale, aceasta poate fi comparată cu un tub de citrat neinoculat.
Se cântăresc 24,2 g de mediu deshidratat pentru un litru de apă. Se amestecă și se lasă să se odihnească aproximativ 5 minute. Terminați dizolvarea mediului prin încălzire timp de 1 sau două minute, agitând frecvent.
Se toarnă 4 ml în eprubete și se autoclavează la 121 ° C timp de 15 minute. La ieșirea din autoclavă, înclinați cu ajutorul unui suport în așa fel încât agarul să se solidifice sub forma unui cioc de flaut cu bloc mic sau fund și mai mult conic.
PH-ul final al mediului citrat este de 6,9 (culoare verde). Acest mediu este foarte sensibil la modificările pH-ului.
La pH 6 sau mai mic, mediul devine galben. Această culoare nu este observată în testul cu bacterii.
Și la pH 7,6 sau mai mare, mediul se transformă într-o culoare albastră prusacă profundă..
Simmons Citrate Agar este utilizat pentru identificarea anumitor microorganisme, în special a bacililor aparținând familiei Enterobacteriaceae și a altor bacili care nu fermentează glucoza.
Mediul citrat Simmons este un test foarte delicat, deoarece se pot obține falsuri pozitive dacă se fac anumite greșeli..
Atenția care trebuie acordată este următoarea:
Nu trebuie făcut un inocul bacterian foarte gros sau încărcat, deoarece poate provoca o culoare galben arămiu în locul plantării, fără a afecta restul mediului, dar poate duce la credința că există creștere. Nu înseamnă pozitivitatea testului.
De asemenea, un inocul gros poate genera un fals pozitiv, deoarece compușii organici preformați din pereții celulari ai bacteriilor pe moarte pot elibera suficient carbon și azot pentru a transforma indicatorul pH-ului..
Prin urmare, idealul este să semănați folosind acul în locul mânerului de platină, pentru a evita luarea excesului de material.
Pe de altă parte, atunci când bateria de teste biochimice este semănată pentru identificarea microorganismului în cauză, este important ca testul citratului să fie primul inoculat, pentru a evita transferul proteinelor sau glucidelor dintr-un alt mediu. ..
În această circumstanță, este posibil să se obțină un fals pozitiv, deoarece oricare dintre aceste substanțe care sunt introduse din greșeală va fi metabolizată și va provoca o modificare a pH-ului..
O altă modalitate de a evita transferul substanțelor este de a arde bine bucla și de a lua un nou inocul între un test și altul..
De asemenea, trebuie să aveți grijă la atingerea coloniei pentru a efectua inoculul, deoarece trebuie evitat să trageți o parte din agar din cultura din care provin bacteriile, datorită celor explicate mai sus..
În acest sens, Matsen, Sherris și Branson recomandă diluarea inoculului în soluție fiziologică înainte de inocularea testului de citrat pentru a evita transferul altor surse de carbon.
Trebuie avut în vedere faptul că intensitatea culorii produse atunci când testul este pozitiv poate varia în funcție de casa comercială.
În plus, există microorganisme care testează pozitiv la 24 de ore, dar există și alte tulpini care necesită 48 de ore sau mai mult pentru a produce o modificare a pH-ului..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.