Fundație, preparare și utilizare a agarului EMB

3813
Charles McCarthy

Agar EMB este un mediu de cultură solid selectiv și diferențial utilizat pentru izolarea bacililor Gram negativi, în principal din familia Enterobacteriaceae, și a altor bacili Gram negativi nerezistenți. Este, de asemenea, cunoscut sub acronimul EAM, care înseamnă albastru de eozină-metilen..

Acest mediu a fost creat de Holt-Harris și Teague în 1916. Conține peptonă, lactoză, zaharoză, fosfat dipotasic, agar, eozină, albastru de metilen și apă. Este foarte asemănător cu Agar MacConkey, mai ales când se utilizează Agar EMB modificat de Levine, care nu conține zaharoză.

Luciu metalic al Escherichia coli pe agar EMB Sursa: Carmen Moreno González [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)], din Wikimedia Commons

De fapt, fiecare laborator decide dacă să lucreze cu unul sau altul, deoarece îndeplinesc aceeași funcție, deși biochimic sunt diferite..

Are chiar același dezavantaj ca agarul clasic MacConkey în ceea ce privește producția de roi din genul Proteus. Prin urmare, pentru a evita acest fenomen, concentrația de agar poate fi crescută cu până la 5%..

Indice articol

  • 1 Justificare
    • 1.1 Selectiv
    • 1.2 Diferențial
  • 2 Pregătirea
  • 3 utilizări
  • 4 Controlul calității
  • 5 Considerații finale
  • 6 Referințe

Bază

Selectiv

Agar EMB este subtil selectiv, deoarece conține coloranți de anilină (eozină și albastru de metilen), care acționează ca inhibitori, împiedicând creșterea majorității bacteriilor Gram pozitive și a unor tije Gram negative rezistente..

Cu toate acestea, acest agar are dezavantajul că unele bacterii gram-pozitive pot rezista prezenței substanțelor inhibitoare și pot crește sub formă de mici colonii incolore, cum ar fi Enterococcus faecalis si ceva Stafilococ.

Anumite drojdii pot crește, de asemenea Complexul Candida albicans, care va da colonii roz foarte mici. Chlamidosporii se pot dezvolta chiar din această drojdie dacă proba este însămânțată adânc..

Diferenţial

Pe de altă parte, agar EMB este, de asemenea, un mediu diferențial, deoarece acești coloranți împreună (eozină și albastru de metilen) au proprietatea de a forma un precipitat la pH acid, de aceea servesc drept indicatori ai producției sale..

Astfel, bacteriile care fermentează slab lactoza sau zaharoza produc colonii violete în decurs de 24 până la 48 de ore. De exemplu, genurile Klebsiella, Enterobacter și Serratia.

Acele bacterii care fermentează puternic lactoza, cum ar fi Escherichia coli, sau zaharoză, cum ar fi Yersinia enterocolitica sau Proteus penneri, formează un precipitat negru-verzui, conferind un aspect caracteristic de luciu metalic la aceste specii.

Trebuie remarcat faptul că dacă se utilizează mediu levin EMB (fără zaharoză), Yersinia enterocolitica Da Proteus penneri va produce colonii clare.

Bacteriile care nu fermentează lactoza sau zaharoza sunt hrănite de prezența peptonelor, care furnizează aminoacizii și azotul necesar creșterii bacteriilor și produc colonii clare. De exemplu, genurile Salmonella și Shigella, printre altele.

De asemenea, este important să rețineți că genul Acinetobacter poate prezenta colonii albastru-lavandă, chiar dacă nu este un fermentator de lactoză sau zaharoză, ci are proprietatea de a fixa albastru de metilen pe peretele său celular. Acest lucru se poate întâmpla și cu alte bacterii oxidative.

Pregătirea

Mediul original deshidratat este de culoare bej deschis.

Pentru a prepara acest mediu de cultură, 36 de grame de mediu deshidratat trebuie cântărite și suspendate într-un balon care conține un litru de apă distilată..

După ce lăsați amestecul să se odihnească timp de 5 minute, duceți balonul la o sursă de căldură, amestecând energic și constant până când fierbe și se dizolvă complet..

Ulterior, mediul de cultură deja dizolvat trebuie sterilizat folosind autoclavul la 121 ° C timp de 15 minute..

La sfârșitul timpului, este scos din autoclavă și lăsat să se odihnească scurt. Apoi, încă cald (45-50 ° C), se servesc 15-20 ml de agar în fiecare cutie Petri sterilă. Mijlocul trebuie să fie albastru de turnus.

După servire plăcile se lasă ușor neacoperite până când agarul se răcește ușor. Sunt apoi acoperite și lăsate să se solidifice complet. Ulterior, acestea sunt comandate în suporturi pentru plăci inversate și depozitate la frigider (8 ° C) până la utilizare..

Această procedură se efectuează, de preferință, într-o hotă cu flux laminar sau în fața arzătorului Bunsen pentru a evita contaminarea.

Este important să rețineți că fiecare casă comercială va indica cantitatea care trebuie cântărită pentru a pregăti mediul de cultură..

PH-ul final al mediului trebuie să fie de 7,2 ± 0,2

Aplicații

Acest mediu este utilizat pentru însămânțarea urinei și a fecalelor sau a oricărui tip de specimen clinic, mai ales dacă se suspectează prezența bacililor gram-negativi nesolicitați, precum bacilii aparținând familiei Enterobacteriaceae, care cresc foarte bine pe acest mediu..

Bacteriile enteropatogene din genurile Shigella și Salmonella se disting prin coloniile lor incolore sau ușor chihlimbar.

Se dezvoltă și alți bacili care nu fermentează lactoza, cum ar fi Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, printre altele..

De asemenea, acest mediu este foarte util în analiza microbiologică a alimentelor și a apei, deoarece este ideal pentru faza completă de confirmare a determinării coliformelor, adică pentru a corobora prezența E coli din bulionele CE tulburi, din cea mai probabilă tehnică numerică (MPN).

QA

Pentru a verifica dacă mediul de cultură proaspăt preparat funcționează bine, se pot planta tulpini de control pentru a respecta caracteristicile coloniilor și pentru a verifica dacă acestea dau cum era de așteptat..

Pentru aceasta, tulpini ATCC sau tulpini bine identificate de E coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa și unele bacterii Gram pozitive, cum ar fi S. aureus.

E de asteptat E coli Generați colonii negre albăstrui bine dezvoltate cu luciu metalic verde. In timp ce, Enterobacter aerogenes Da Klebsiella sp ar trebui să dea colonii mucoase albastru-negru bine dezvoltate.

La rândul său, Salmonella tifimuriu Da Shigella flexneri, ar trebui să dezvolte colonii mari, incolore sau ușor chihlimbar.

În cele din urmă genul Pseudomonas aeruginosa crește ca colonii incolore de dimensiuni neregulate, în timp ce bacteriile Gram pozitive ar trebui să fie total inhibate sau să crească rar cu colonii foarte mici.

Gânduri finale

Uneori sterilizarea face ca albastrul de metilen să fie redus, prezentând o culoare portocalie medie. Pentru ca albastrul de metilen să se oxideze și să recupereze culoarea mov, acesta trebuie amestecat ușor până când culoarea este recuperată..

De asemenea, după sterilizare, colorantul poate precipita, deci trebuie amestecat bine înainte de a servi vasele Petri..

Referințe

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B și Velázquez O. 2009. Tehnici pentru analiza microbiologică a alimentelor. A 2-a ed. Facultatea de Chimie, UNAM. Mexic.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Caracterizarea și distribuția tulpinilor de Escherichia coli Potențial patogen izolat de pui de carne de la fermele de păsări din Peru. Pr. Investiga. veterinar. Peru 2012 23 (2): 209-219. Disponibil la: scielo.org.
  3. Laboratorios Conda S.A. Eozină și Agar albastru de metilen. 2010. Disponibil la: condalab.com
  4. Laboratoarele Britannia. Levine E.M.B (With Eosin and Methylene Blue) 2011. Disponibil la: britanialab.com
  5. Laboratoarele BD. BD EMB Agar (Eosin Metilen Blue Agar), modificat. 2013. Disponibil la: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. (Ed. A 5-a). Argentina, Editorial Panamericana S.A.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnosticul microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana S.A

Nimeni nu a comentat acest articol încă.