Fundație, preparare și utilizare a agarului de porumb

1435
Anthony Golden
Fundație, preparare și utilizare a agarului de porumb

agar de porumb este un mediu de cultură solid, cu putere nutritivă redusă, util pentru subcultivarea anumitor ciuperci și pentru demonstrarea clamidosporilor în tulpini ale complexului Candida albicans. În limba engleză este cunoscut sub numele de Agar de porumb.

Mediul convențional de făină de porumb are o compoziție foarte simplă, conține făină de porumb, agar-agar și apă. Datorită nivelului său nutritiv scăzut, este ideal pentru utilizare în întreținerea tulpinilor fungice pentru perioade moderate de timp, în special a ciupercilor negre..

A. Reprezentarea grafică a complexului Candida albicans pe agar de făină de porumb. B. Chlamydospores din complexul Candida albicans văzut la microscop, format pe agar de făină de porumb. Sursă: A. GrahamColm [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)♡/ By: CDC / Dr. William Kaplan, prin amabilitatea: Biblioteca de imagini de sănătate publică.

Sporularea complexului Candida albicans este favorizat în acest mediu, dacă se adaugă 1% din Tween 80 în timpul preparării agarului. Formarea clamidosporilor este caracteristică acestei specii și practic singura care afectează oamenii..

Există și alte specii care formează clamidospori, dar este puțin probabil să afecteze oamenii, cum ar fi Candida australis, prezente în excremente de pinguini sau C. clausenii, care este un saprofit rar întâlnit. La fel, în mod excepțional specia C. stellatoidea Da C. tropicalis le-ar putea forma.

Pe de altă parte, adăugarea de glucoză în mediul de porumb favorizează formarea de pigmenți în tulpini de Trichophytom rubrum.

Este important să rețineți că există ciuperci care nu formează hife sau pseudohife în agar de făină de porumb, cum ar fi Cryptococcus neoformans, diferențierea de alte genuri.

Agarul din făină de porumb poate fi făcut de casă în laborator sau poate fi utilizat și suport comercial..

Indice articol

  • 1 Justificare
  • 2 Pregătirea
    • 2.1 Agar comercial din făină de porumb
    • 2.2 Agar de făină de porumb cu Tween 80
    • 2.3 Agar de făină de porumb cu glucoză
  • 3 Utilizați
    • 3.1 Semănat
    • 3.2 Demonstrarea clamidosporilor
    • 3.3 Întreținerea tulpinilor fungice
  • 4 Controlul calității
  • 5 Limitări
  • 6 Referințe

Bază

Făina de porumb este substratul, agarul este agentul de solidificare, iar apa este solventul..

Agarul din făină de porumb poate fi suplimentat cu tween 80 (sorbitan monooleat sau polisorbat poliester 80). Acest compus reduce tensiunea superficială a mediului datorită puterii sale de emulsionare.

De asemenea, creează un mediu ostil care inhibă multiplicarea exagerată a celulelor și stimulează creșterea hifelor, favorizând, de asemenea, producția de clamidospori; acesta din urmă a considerat structuri de rezistență. Această structură ajută la identificarea speciilor de Candida albicans.

La rândul său, glucoza din acest mediu crește capacitatea de formare a pigmentului unor ciuperci..

Trebuie remarcat faptul că făina de porumb cu glucoză medie nu servește pentru a demonstra clamidospori în cComplexul Candida albicans.

Pregătirea

Preparare de agar de porumb de casă

Se cântăresc 47 g de făină galbenă de porumb și se dizolvă în 500 ml apă distilată. Se încălzește la 60 ° C, amestecând preparatul pentru o perioadă de aproximativ 1 oră. Apoi se filtrează printr-o bucată de tifon și bumbac, opțional poate fi filtrat din nou prin trecerea preparatului printr-o hârtie de filtru Whatman nr. 2.

Aduceți volumul la 1000 ml cu apă distilată. Adăugați 17 g de agar-agar, încălziți până se dizolvă. Autoclavează 15 minute la 121 ° C.

Se servește în vase Petri sterile. Se păstrează la frigider.

Culoarea mediului preparat este albicioasă, cu aspect nodulos.

Dacă doriți să preparați făină de porumb cu glucoză la preparatul descris mai sus, adăugați 10 g de glucoză.

Agar comercial din făină de porumb

Se cântăresc 17 g de mediu deshidratat și se dizolvă în 1 litru de apă distilată. Amestecul poate fi încălzit, agitând ușor pentru a se dizolva complet. Sterilizați într-o autoclavă la 121 ° C, la 15 lb, timp de 15 minute.

Se toarnă în vase Petri sterile. Să se solidifice. Răsturnați și păstrați la frigider până la utilizare. Se temperează înainte de utilizare.

PH-ul trebuie să fie de 6,0 ± 0,2 la 25 ° C.

Agar de făină de porumb cu Tween 80

Pentru a respecta ISO 18416, agarul din făină de porumb trebuie preparat după cum urmează:

Se cântăresc 65 de grame pe litru și se adaugă 10 ml de Tween 80. Se încălzește și se fierbe câteva minute până se dizolvă, având grijă să nu se supraîncălzească prea mult. Sterilizați la 121 ° C timp de 15 minute.

Agar de făină de porumb cu glucoză

Pentru a spori puterea cromogenă a coloniilor de Trichophyton rubrum și diferențiați-le de T. mentagrofite, La formula originală se poate adăuga 0,2% glucoză. Nu trebuie să aveți Tween 80, deoarece glucoza inhibă formarea de clamidospori.

Utilizare

În principal, utilizarea agarului de făină de porumb este destinată studiului tulpinilor de Candida, ajutând la identificarea acestora prin observarea caracteristică a clamidosporilor la speciile albicans. Adică, utilizarea acestui agar servește ca metodă auxiliară de identificare a acestor drojdii..

Ambele specii saprofite și patogene se pot dezvolta pe acest agar, dar fiecare formează structuri miceliale caracteristice. De exemplu, speciile din genul Torulopsis nu produc miceliu și se reproduc numai prin blastoconidie..

La fel, speciile Trichosporon și Geotrichum produc arthroconidia pe agar de făină de porumb și uneori este dificil să se facă distincția între una și alta..

Arthroconidia din genul Geotrichum produce o extensie a hifelor asemănătoare unui băț de hochei..

De asemenea, producția de pigmenți utilizând agar de făină de porumb suplimentat cu glucoză este utilă pentru identificarea Trichophytom rubrum.

Semănat

Coloniile suspecte de Candida obținute în mediul de cultură primar - agar Sabouraud - din probe clinice, produse cosmetice, soluri, printre altele, sunt subculturate pe agar de făină de porumb. Mediul este însămânțat și incubat la 22 ° C timp de 24 până la 48 de ore. Timpul de incubație poate fi prelungit dacă este necesar.

Demonstrație Chlamydospore

În acest scop, agarul de făină de porumb cu Tween 80 trebuie inoculat folosind tehnica Dalmau. Această metodă constă în luarea unei porțiuni din colonia suspectată cu mânerul de platină și efectuarea a trei tăieturi paralele în mijloc, menținând mânerul la 45 °. Tăieturile trebuie separate de o distanță de 1 cm una de cealaltă.

Ulterior, un obiect de acoperire flăcat anterior este plasat pe dungile care au fost semănate, astfel încât jumătate să fie acoperită și cealaltă să fie descoperită.

Incubați plăcile însămânțate la 30 ° C timp de 48-72 h și apoi examinați microscopic prin foaia de acoperire..

Întreținerea tulpinilor fungice

Pentru întreținerea tulpinilor, plăcile însămânțate și cultivate sunt depozitate la frigider (4-8 ° C). În acest fel, pot dura câteva săptămâni și pot fi utilizate în scopuri didactice sau de cercetare..

QA

Pentru controlul sterilității, o placă este incubată fără inoculare la temperatura camerei, este de așteptat să nu existe creșterea sau schimbarea culorii.

Pentru controlul calității, tulpini cunoscute precum: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Rezultatele așteptate sunt inhibarea parțială pentru S. aureus Da E coli. Deși se așteaptă o creștere satisfăcătoare în restul tulpinilor.

Aspergillus niger crește cu colonii negre și sporulate într-un timp aproximativ de 5 zile de incubație.

Candida albicans colonii de drojdie cu producție de clamidospori.

Saccharomyces cerevisiae produc celule mari de drojdie.

Limitări

În partea de jos a plăcii se formează un precipitat galben care nu trebuie confundat cu coloniile..

Referințe

  1. Laboratoarele Neogen. Agar de porumb. Disponibil la: foodsafety.neogen.com.
  2. Microkit de cultură. Agar de porumb. Disponibil la: Medioscultivo.com.
  3. Linares M, Solís F. Ghid de identificare a drojdiei. Disponibil la: http: //www.guia.revibero.
  4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Sănătate publică, 2002; 19 (4): 206-208. Disponibil la: Scielo.com
  5. Casas-Rincón G. Micologie generală. 1994. Ediția a II-a. Universitatea Centrală din Venezuela, Edițiile bibliotecii. Venezuela Caracas.
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosticul microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. A 5-a ed. Editorial Panamericana S.A. Argentina.
  8. Castillo E. Studiu comparativ al unor metode macro și microscopice pentru izolarea și recunoașterea genului Candida. Rev. columbian de științe chimice farmaceutice. 1970; 3 (1): 33-57. Disponibil la: Ciencias.unal.edu.co

Nimeni nu a comentat acest articol încă.