agar M.R.S. este un mediu de cultură solid selectiv, utilizat pentru izolarea și numărarea bacteriilor lactice, în special din genul Lactobacillus. Acest agar a fost creat în 1960 de Man, Rogosa și Sharpe, purtând același nume, dar datorită complexității sale, este adesea utilizată abrevierea M.R.S..
Este compus din proteoză peptonă, extract de carne, extract de drojdie, glucoză, monoleat de sorbitan, fosfat dipotasic, acetat de sodiu, citrat de amoniu, sulfat de magneziu, sulfat de mangan și agar..
Această compoziție permite dezvoltarea corectă a bacteriilor lactice din probe clinice, cum ar fi fecale, scurgeri vaginale, probe orale și lapte matern, precum și alimente lactate și din carne.
Nu este utilizat în mod obișnuit în laboratoarele clinice, deoarece bacteriile lactice sunt rareori implicate în procesele de boală. Cu toate acestea, în zona microbiologiei alimentare, utilizarea agarului M.R.S este mai frecventă..
Pe de altă parte, acest mediu este utilizat de unele centre de cercetare al căror obiectiv este studiul bacteriilor lactice..
Indice articol
Agar Man, Rogosa și Sharpe are o compoziție destul de complexă. Prin descompunerea funcției fiecăreia dintre componentele sale, se poate explica baza sa.
Peptona proteică, extractul de carne, extractul de drojdie și glucoza sunt substanțe nutritive care furnizează sursa de carbon, azot, vitamine și minerale necesare pentru dezvoltarea bacteriilor. În plus, glucoza este sursa universală de energie utilizată în majoritatea mediilor de cultură..
Pe de altă parte, pentru a promova creșterea bacteriilor lactice, este necesară prezența cofactorilor (cationilor) esențiali în metabolismul Lactobacillus și al bacteriilor înrudite; acești compuși sunt sărurile de sodiu, magneziu și mangan.
La fel, sorbitan monoleat sau polisorbat 80 sunt o sursă importantă de acizi grași, deoarece sunt absorbiți ca nutrienți..
În plus, monoleatul de sorbitan și citratul de amoniu acționează prin inhibarea dezvoltării florei însoțitoare, în special a bacteriilor Gram negative, oferind caracterul selectiv al acestui agar..
În cele din urmă, agar-agar este cel care asigură consistența solidă a mediului.
Există alte variante de agar Man Rogosa Sharpe; una dintre ele este suplimentată cu cisteină (M.R.S.c), foarte utilă pentru izolarea bifidobacteriilor, printre alte microorganisme. Pe de altă parte, există mediul MRS suplimentat cu neomicină, paromomicină, acid nalidixic și clorură de litiu, în special pentru numărarea selectivă a bifidobacteriilor din produsele lactate..
Se cântăresc 68,25 grame de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Lasati sa stea 5 minute. Pentru a se dizolva complet, transformați-vă într-o sursă de căldură, amestecând frecvent, și fierbeți timp de 1-2 minute. Sterilizați în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.
La ieșirea din autoclavă, lăsați să stea câteva minute și distribuiți-l în timp ce este încă fierbinte în cutii Petri sterile..
Lăsați plăcile să se solidifice și să inverseze plăcile, comandați-le în rafturile pentru plăci și dați la frigider până la utilizare. Lăsați plăcile să ajungă la temperatura camerei înainte de utilizare.
PH-ul mediului trebuie să fie de 6,4 ± 0,2. Unele case comerciale recomandă pH între 5,5 și 5,9.
Mediul deshidratat este bej și preparat este chihlimbar închis.
Atât mediul deshidratat, cât și plăcile preparate trebuie depozitate la 2-8 ° C..
M.R.S. Pot fi semănate la suprafață (epuizare sau cu spatulă Drigalski). Poate fi semănat și după adâncime. Plăcile trebuie incubate la 37 ° C în microaerofilicitate (4% ODouă și 5-10% CODouă) timp de 24 până la 72 de ore.
Metoda de însămânțare este aleasă în funcție de scopul urmărit (izolare sau numărare).
Coloniile prezumtive de Lactobacillus cresc de culoare albicioasă și au un aspect mucoid sau cremos pe acest agar. Ulterior trebuie identificate.
Pentru aceasta se utilizează însămânțarea de suprafață. Probele care vor fi însămânțate necesită o procedură anterioară.
În cazul probelor de lapte matern, se recomandă centrifugarea a 1 ml din probă la 14.000 rpm timp de 10 minute, pentru a îndepărta stratul gras. 900 µl sunt aruncați, iar în restul de 100 µl peleta este suspendată și turnată pe suprafața M.R.S. Apoi trebuie distribuit uniform cu o spatulă Drigalski..
În cazul probelor de scaun, un (1) gram de scaun este cântărit și omogenizat în 9 ml de apă peptonă sterilă 0,1%, corespunzând unei diluții 1/10. Apoi se fac diluții în serie, până la o diluție finală de 10-4.
În cele din urmă, se iau 100 μl din cele 10 diluții-Două, 10-3 și 10-4 și fiecare diluție este însămânțată pe agar MRS, distribuind uniform cu o spatulă Drigalski.
În acest caz semănatul se face prin adâncime.
Pentru probele de lapte matern, se ia 1 mL și se introduce într-un tub de plastic steril conic. Agar MRS se adaugă la o temperatură aproximativă de 40 ° C la un volum final de 25 ml, obținându-se un amestec omogen. Ulterior, este turnat în cutii Petri sterile într-un mod uniform și lăsat să se odihnească până la polimerizare..
Pentru probele de scaun, se fac diluții, așa cum s-a descris anterior. Luați 1 ml din fiecare diluție și puneți-l în tuburi sterile de plastic conice. Agar MRS topit se adaugă la un volum de 25 ml.
Amestecul din fiecare diluare este turnat uniform în cutii Petri sterile. În cele din urmă se lasă să se odihnească până la polimerizarea sa.
În fiecare zi, studiul bacteriilor lactice câștigă mai mult interes; Cercetătorii urmăresc în special să afle despre noile tulpini și potențialul lor ca fermentanți inițiali pentru standardizarea în fabricarea produselor lactate, printre alte utilizări..
În acest sens, Alvarado și colab. (2007) au folosit M.R.S. să efectueze un studiu în care au izolat, identificat și caracterizat bacteriile lactice prezente într-o brânză venezueleană fumată artizan andin.
În brânză au descoperit prezența bacteriilor din genurile Lactococcus și Lactobacillus și au ajuns la concluzia că amestecurile de tulpini izolate sunt potrivite ca tulpini inițiale în fabricarea brânzei din lapte pasteurizat..
Pe de altă parte, Sánchez și colab. (2017) a folosit M.R.S. să investigheze prezența bacteriilor lactice în tractul digestiv al purceilor, pentru a le folosi ca probiotice native care măresc productivitatea purceilor sănătoși.
Cu acest mediu au reușit să izoleze patru specii: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae Da Pediococcus pentosaceus.
La fel, Báez și colab. (2019) folosit M.R.S. pentru a evalua bacteriile lactice (LAB) și bifidobacteriile cu potențial probiotic în laptele matern și fecalele pentru sugari.
Au reușit să izoleze 11 BAL și 3 Bifidobacteria sp în laptele matern și 8 BAL și 2 Bifidobacteria sp. în fecale. Toți au îndeplinit anumiți parametri care le demonstrează ca bacterii cu activitate probiotică.
Autorii au concluzionat că atât laptele matern, cât și fecalele sugarilor alăptați exclusiv servesc drept surse naturale de bacterii probiotice..
Pentru a evalua calitatea M.R.S. Tulpini de control, cum ar fi:
Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli și Bacillus cereus.
Rezultatele așteptate sunt o creștere satisfăcătoare pentru primele 6 bacterii, în timp ce E coli Da Bacillus cereus trebuie complet inhibat.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.