Agar TCBS este un mediu de cultură solid extrem de selectiv și diferențial, utilizat pentru izolarea și cultivarea bacteriilor din genul Vibrio, în special Vibrio cholerae, V. vulnificus Da V. parahaemolyticus ca principali agenți patogeni ai acestui gen.
Acronimul TCBS înseamnă tiosulfat citrat biliar zaharoză. Acest agar este cunoscut și ca mediu selectiv pentru Vibrios. Formula originală a fost creată de Nakanishi și ulterior modificată de Kobayashi.
Este compus din extract de drojdie, peptonă de carne, tripteină, citrat de sodiu, tiosulfat de sodiu, bilă de bou, zaharoză, clorură de sodiu, citrat feric, albastru de bromotimol, albastru de timol și agar..
Această compoziție permite o dezvoltare adecvată a speciilor Vibrio din probe de apă, alimente și fecale; cu exceptia Vibrio hollisae, care nu crește în acest mediu. În plus, mediul TCBS este capabil să inhibe creșterea altor bacterii însoțitoare, în special a coliformelor..
Datorită problemelor gastrointestinale și extraintestinale grave pe care le produc unele specii din genul Vibrio, diagnosticul său este foarte important. Oamenii sunt infectați în principal prin consumul de alimente crude sau slab gătite din mare sau din apele poluate, dar și prin infecția rănilor.
Din această cauză, laboratoarele clinice ar trebui să includă agar TCBS în studiul culturii scaunului a probelor lichide de scaun, în special cu apariția apei de orez. Mai ales dacă pacientul raportează că a fost în contact cu apa de mare sau că a consumat crustacee sau pești.
Indice articol
Extractul de drojdie, peptonele de carne și tripteina sunt sursa nutrițională a acestui mediu. Cu toate acestea, agar TCBS este un mediu inhospitalier pentru majoritatea bacteriilor..
Selectivitatea sa ridicată este dată de adăugarea de citrat de sodiu și bilă de bou; ambii sunt agenți inhibitori care oferă, de asemenea, un pH alcalin mediului, restricționând creșterea florei însoțitoare și favorizând creșterea V. cholerae, printre alte specii. În special Vibrio cholerae este foarte sensibil la aciditate.
La rândul său, clorura de sodiu echilibrează osmotic mediul. În plus, deoarece concentrația sa este mare, acționează și ca agent inhibitor, favorizând dezvoltarea bacteriilor halofile..
Zaharoza este zahărul fermentabil care, împreună cu indicatorii de pH albastru bromotimol și albastru timol, conferă mediului caracterul diferențial. Din acest motiv, cu acest mediu este posibil să se diferențieze tulpinile de fermentare a zaharozei de cele care nu fermentează..
Coloniile de tulpini de fermentare a zaharozei dezvoltă o culoare galbenă și vor transforma mediul de la verde la galben prin producția de acid. Non-fermentatorii devin translucizi, iar mediul rămâne culoarea originală (verde).
La fel, acest mediu conține tiosulfat de sodiu ca sursă de sulf și citrat feric ca agent de dezvoltare. Ambele prezintă bacterii capabile să producă hidrogen sulfurat (gaz incolor). HDouăS se formează din tiosulfat și ulterior, la reacția cu citrat feric, se formează un precipitat negru vizibil..
În cele din urmă, agar este cel care asigură consistența solidă a mediului.
Se cântăresc 89 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Ajutați dizolvarea prin încălzire și agitare frecventă. Amestecul poate fi fiert până la 2 minute..
Acest mediu nu este autoclavizat. După dizolvare, se servește direct pe plăci sterile. Când se solidifică, acestea sunt aranjate în mod inversat în plachere și depozitate la frigider (2-8 ° C) până la utilizare..
Mediul după preparare trebuie să rămână la pH 8,6 ± 0,2.
Culoarea mediului deshidratat este bej deschis sau verde-bej, iar culoarea mediului este verde pădure sau verde albăstrui.
Este important să permiteți plăcilor să se încălzească înainte de însămânțarea probelor..
Cel mai frecvent specimen pentru izolarea Vibrios este scaun diareic..
Probele de scaun dacă nu pot fi însămânțate imediat pe mediul selectiv, trebuie transportate pe mediul Cary Blair..
Pentru a crește sensibilitatea culturii, fecalele pot fi trecute prin apă peptonică la pH 8,4 ca mediu de îmbogățire pentru maxim 8 ore, de acolo este subcultivat la mediu TCBS..
De asemenea, trebuie luat în considerare faptul că unele tulpini de Vibrios pot provoca septicemie la pacienții imunosupresați, prin urmare pot fi izolate din hemoculturi. De asemenea, probele de apă și alimente din mare pot fi analizate atunci când există focare epidemice de boală de holeră..
Inoculul eșantionului studiat trebuie să fie proeminent, însămânțarea se efectuează prin metoda striației prin epuizare. Plăcile sunt incubate la 37 ° C timp de 24 de ore în aerobioză.
Coloniile prezumtive ale Vibrio cholerae sunt de dimensiuni medii, netede, opace, cu margini subțiri și de culoare galbenă datorită zaharozei fermentate.
În mod similar, speciile de V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii si ceva V. vulnificus. Alte specii Vibrios importante din punct de vedere clinic, cum ar fi V. parahaemolyticus nu fermentați zaharoza, dezvoltându-se ca colonii verde măslin.
Pe de altă parte, trebuie avut în vedere faptul că unele tulpini de Aeromonas și Plesiomonas care sunt oxidază (+) pot crește în acest mediu, dezvoltând colonii galbene care pot deruta clinicianul. În timp ce unele tulpini de Pseudomonas oxidază (+) cresc la fel ca coloniile verzi V. parahaemolyticus.
Testul oxidazei care este pozitiv pentru genul Vibrio nu trebuie efectuat niciodată din colonii obținute din agar TCBS, deoarece rezultatul obținut va fi un fals negativ. Compușii din mijloc interferează puternic cu acest test. Prin urmare, trebuie efectuat din subculturi pe agar de sânge..
Pentru a dovedi că mediul este în stare bună, este recomandabil să se semene tulpini de control cunoscute sau certificate și să se observe dacă creșterea îndeplinește caracteristicile așteptate..
Pentru aceasta puteți utiliza tulpini de:
-Vibrio cholerae - creștere satisfăcătoare (colonii galbene, graniță translucidă).
-Vibrio parahaemolyticus - creștere satisfăcătoare (colonie cu centru verde și margine translucidă).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - creștere satisfăcătoare (colonii galbene cu halouri de aceeași culoare în jurul coloniei).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - inhibiție totală sau parțială (mici colonii galbene sau translucide).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- inhibiție parțială sau totală (colonii albastre).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Inhibat complet.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Inhibare totală sau parțială. (Colonii mici, centru verde, marginea translucidă).
Incubația mediului neinoculat nu trebuie modificată.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.