Thayer Martin agar este un mediu solid extrem de nutritiv și selectiv pentru izolarea Neisseria meningitidis și Neisseria gonorrhoeae; ambele cunoscute sub numele de Neisserias patogene sau clinice importante.
Una dintre cele mai importante caracteristici speciale ale Thayer Martin Agar este conținutul său ridicat de suplimente nutritive. Această proprietate este esențială, deoarece Neisserias sunt microorganisme foarte exigente din punct de vedere nutrițional și, prin urmare, nu cresc în medii comune..
Pe de altă parte, deoarece aceste microorganisme se găsesc în mod normal în zone nesterile, este necesar să adăugați inhibitori care împiedică dezvoltarea florei însoțitoare, fără a afecta dezvoltarea genului Neisseria..
Acest agar este compus din agar de bază GC, hemoglobină, suplimente nutritive suplimentare și un complex de substanțe inhibitoare (antibiotice și antifungice). Casele comerciale vând fiecare supliment suplimentar separat.
Proba care va fi însămânțată în acest mediu va depinde de microorganismul căutat. Pentru a Neisseria gonoree probele ideale sunt secrețiile vaginale și uretrale. În timp ce pentru Neisseria meningitidis cele mai utilizate probe sunt LCR, exudatele faringiene și nazofaringiene.
Indice articol
Neisserias sunt microorganisme clasificate ca enervante și, prin urmare, izolarea lor este dificilă. Din acest motiv, Thayer Martín este un mediu complex și fiecare dintre componentele sale îndeplinește o funcție care este explicată mai jos:
Agar GC conține proteoză peptonă, amidon de porumb, clorură de sodiu, fosfat dipotasic, fosfat monopotassic și agar-agar. Componentele sale furnizează substanțele nutritive de bază pentru dezvoltarea microbiană, neutralizează acizii grași toxici, ajută la menținerea echilibrului osmotic, definesc pH-ul și asigură consistență solidă mediului..
Hemoglobina furnizează factorii V și X (nicotinamidă adenină dinucleotidă NAD și, respectiv, hemină). Din acest motiv, speciile Haemophilus cresc și în acest mediu. Hemoglobina poate fi obținută comercial sub formă deshidratată sau sângele proaspăt de bovine defibrinat poate fi adăugat la mediu..
Pe de altă parte, trebuie adăugat un supliment de îmbogățire la mediul Thayer-Martin, deoarece substanțele nutritive conținute în agar de bază nu sunt suficiente pentru cerințele genului Neisseria..
Cel mai frecvent utilizat supliment de îmbogățire se numește isovitalex. Conține glutamină, adenină, NAD, cocarboxilază, guanină, azotat feric, acid p-amino benzoic, vitamina B12, tiamină și glucoză. Toți acești compuși sunt necesari pentru dezvoltarea corectă a neisseriei patogene.
Deoarece este un mediu extrem de nutritiv, trebuie utilizați inhibitori care împiedică dezvoltarea microorganismelor din flora obișnuită a zonei și favorizează astfel izolarea genului Neisseria..
Complexul inhibitor este compus din vancomicină, colistină și nistatină. Vancomicina inhibă creșterea bacteriilor Gram pozitive, colistina previne dezvoltarea bacteriilor Gram negative, cum ar fi Pseudomonas și unele Neisserias saprofite, iar nistatina acționează asupra drojdiei ca Candida albicans.
Cu toate acestea, Thayer Martin Agar a fost modificat ulterior; modificările au constat în adăugarea de trimetoprim, creșterea cantității de agar și adăugarea de glucoză suplimentară. Aceste modificări au îmbunătățit semnificativ recuperarea speciilor de Neisseria gonorrhoeae.
Trebuie remarcat faptul că trimetoprimul inhibă creșterea genului Proteus și formarea consecventă de roire a acestuia. În acest sens, antibioticele sunt cele care oferă caracterul selectiv mediului Thayer Martin.
Se cântăresc 8,2 g de mediu GC deshidratat și se suspendă în 100 ml. Se amestecă și se fierbe timp de 1 minut cu agitare frecventă pentru a se dizolva complet. Sterilizați amestecul într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.
Se suspendă 2 g de hemoglobină deshidratată în 2 sau 3 ml de apă fierbinte distilată până se formează un amestec uniform. Adăugați mai multă apă puțin câte puțin pentru a face un volum de 100 ml. Suspensia trebuie să fie omogenă înainte de sterilizare.
Sterilizați în autoclavă timp de 15 minute.
Reconstituiți flaconul comercial cu diluantul furnizat de aceeași companie comercială. Amesteca bine. Cantitatea de diluant de utilizat va fi specificată în instrucțiunile kitului..
Reconstituiți flaconul cu diluantul furnizat de compania comercială. Amesteca bine. Cantitatea de diluant de utilizat va fi specificată în instrucțiunile kitului..
Pentru fiecare 100 ml de agar GC procedați după cum urmează:
Când agarul GC părăsește autoclavul, lăsați-l să se răcească la o temperatură de aproximativ 50 ° C și adăugați 2 ml din soluția preparată de hemoglobină, 2 ml din suplimentul de îmbogățire (isobitalex sau britalex) și 2 ml din suplimentul de inhibare. Se amestecă și se servește în vase Petri sterile..
Se lasă să se solidifice și se păstrează la frigider până la utilizare.
Culoarea mediului pregătit este roșu vișiniu. PH-ul final al mediului este de 7,2 ± 0,2
Se cântăresc 8,2 g de mediu GC deshidratat și se suspendă în 100 ml. Adăugați 1 g de agar-agar și adăugați 0,3 g de glucoză. Se amestecă și se fierbe timp de 1 minut cu agitare frecventă pentru a se dizolva complet. Sterilizați amestecul într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.
Pregătiți suplimentul de hemoglobină și îmbogățire așa cum este descris mai sus.
Suplimentul de inhibare utilizat este V.C.N.T (vancomicină, colistină, nistatină, trimetoprim).
Procedați așa cum este descris pentru agarul Thayer Martin original.
Thayer Martin Agar ar trebui lăsat să se încălzească înainte ca exemplarele să fie dungate. Probele utilizate în mod obișnuit sunt tampoane faringiene, tampoane nazale, scurgeri vaginale, uretrale și / sau rectale și LCR..
Utilizați probe proaspete și faceți inoculuri puternice pe agar. Probele sunt semănate direct prin descărcarea materialului și apoi prin epuizare pe suprafață.
Plăcile sunt incubate la 35-37 ° C timp de 24 până la 48 de ore într-un borcan microaerofil (5% CODouă). La sfârșitul timpului de incubație, plăcile sunt examinate pentru a găsi colonii mici, de culoare gri și, uneori, cu aspect mucoid..
Efectuați teste Gram și confirmare biochimice pe colonii suspecte.
Următoarele tulpini microbiene pot fi utilizate pentru a efectua controlul calității pe Thayer Martin Agar.
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 și Neisseria meningitidis ATCC 13090; se așteaptă o dezvoltare satisfăcătoare la ambele tulpini.
Ar trebui incluse și următoarele tulpini: Stafilococ epidermid ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 și Candida albicans ATCC 10231. În toate acestea, este de așteptat o inhibare totală sau parțială în acest mediu..
-Trebuie avut în vedere faptul că bacteriile rezistente la inhibitorii utilizați pot crește în mediu.
-Există tulpini de Neisseria gonoree care poate fi sensibil la concentrația de vancomicină utilizată. Din acest motiv, se recomandă utilizarea agarului de ciocolată suplimentat cu isovitalex, dar fără inhibitori..
-Există tulpini de drojdie rezistente la nistatină care pot crește în acest mediu și pot interfera cu izolarea Neisserias-urilor patogene, în special a gonococilor..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.