cromatograma este o înregistrare grafică bidimensională obținută pe un mediu absorbant, care arată separarea substanțelor prin cromatografie. Un model vizibil, vârfuri sau pete, se formează pe cromatogramă, reflectând separarea fizică a componentelor unui amestec.
Cifra inferioară este o cromatogramă cu trei vârfuri, A, B și C, a trei componente ale probei separate prin cromatografie. Se observă că fiecare dintre cele trei vârfuri are o înălțime și o locație diferite pe axa timpului cromatogramei..
Axa ordonată sau Y înregistrează informații despre intensitatea semnalului (în milivolți mV în acest caz). Reprezintă înregistrarea, în funcție de detector, a unor proprietăți fizice ale substanței sau ale componentei separate a amestecului.
Înălțimea vârfului este proporțională cu concentrația componentului separat de eșantion într-un sistem optim. Astfel, de exemplu, este ușor de vizualizat că componenta B se găsește într-o proporție mai mare decât A și C.
Pe axa abscisă sau X, este reprezentat timpul de reținere a componentelor probei sau amestecului. Este timpul care trece de la injectarea probei până când se oprește, fiind diferit pentru fiecare substanță pură.
Indice articol
Este înregistrarea finală a întregului proces de cromatografie. Parametrii care prezintă interes analitic sunt obținuți din acesta. Aceasta poate fi obținută sub formă de fișier electronic, histogramă tipărită sau pe suportul procesului; pe hârtie, de exemplu.
Axa Y este generată de detectoarele de răspuns de semnal sau de intensitate, cum ar fi spectrofotometrele. Este esențială o analiză optimă a timpului, a caracteristicilor vârfurilor sau petelor obținute; dimensiunea, locația, culoarea, printre alte aspecte.
Analizele cromatogramei necesită în general utilizarea unor controale sau standarde, substanțe de identitate și concentrare cunoscute. Analiza acestor controale permite stabilirea prin comparație cu probele caracteristice ale componentelor probei investigate.
În cromatogramă se poate realiza observarea și analiza modului în care s-a realizat separarea componentelor unui amestec. Studiul său optim permite identificarea unei substanțe, demonstrarea purității acesteia, cuantificarea cantității de substanțe prezente într-un amestec, printre alte aspecte.
Informațiile extrase pot fi calitative; de exemplu, atunci când substanțele sunt identificate și puritatea lor determinată. Informațiile cantitative se referă la determinarea numărului de componente din amestec și la concentrația analitului separat..
Analizând rezultatele cromatogramei, pot fi identificate diferite substanțe prin compararea timpilor de retenție cu cei ai substanțelor cunoscute. Se poate observa dacă substanțele studiate parcurg aceeași distanță dacă au același timp cu substanțele cunoscute.
De exemplu, cromatograma poate detecta și identifica metaboliții medicamentelor, cum ar fi stimulanții și steroizii din urina sportivilor. Este un sprijin important în studiul și cercetarea unor metaboliți produși de tulburări genetice la nou-născut.
Cromatograma facilitează detectarea hidrocarburilor halogenate prezente în apa potabilă, printre alte substanțe. Este esențial în analizele de laborator de control al calității, deoarece permite detectarea și identificarea contaminanților prezenți în diferitele produse.
Într-o cromatogramă puteți distinge între substanțele pure și cele impure. O substanță pură ar produce un singur vârf pe cromatogramă; în timp ce o substanță impură ar produce două sau mai multe vârfuri.
Prin ajustarea corectă a condițiilor în care se efectuează cromatografia, două substanțe pot fi împiedicate să formeze un singur vârf..
Analizând aria de vârf a cromatogramei, se poate calcula concentrația componentelor probei.
Prin urmare, aria vârfului este proporțională cu cantitatea de substanță prezentă în probă. Aceste date cantitative sunt obținute în sisteme foarte sensibile, cum ar fi cele generate de cromatografie cu gaz sau lichid, de exemplu.
Una dintre clasificările cromatogramelor este strâns legată de diferitele tipuri de cromatografie, care generează cromatograma corespunzătoare..
În funcție de condițiile de funcționare, detectoarele, printre alte aspecte, cromatograma vor varia în ceea ce privește conținutul și calitatea sa..
Cromatograma poate fi generată direct pe hârtie sau strat subțire, arătând direct distribuția sau distribuția componentelor probei.
Este foarte util pentru separarea și studiul substanțelor colorate care au pigmenți naturali, precum clorofila. Poate fi supus proceselor de dezvoltare în cazul în care substanțele nu au culoare naturală și este util pentru studii calitative.
Cromatograma poate fi obținută și cu ajutorul unui detector care înregistrează răspunsul, ieșirea sau semnalul final al cromatografiei. Așa cum am menționat anterior, acest detector este de obicei un spectrofotometru, un spectrometru de masă, secvențiale automate, electrochimice, printre altele..
Cromatogramele generate în coloane, indiferent dacă sunt gaze sau lichide, precum și cele de înaltă rezoluție în straturi subțiri, utilizează detectoare.
În funcție de tipul de detector, cromatograma poate fi clasificată în diferențial sau integral, în funcție de forma de răspuns a detectorului..
Un detector diferențial măsoară continuu semnalul de răspuns din cromatogramă, în timp ce detectoarele integrale măsoară cumulativ semnalul corespunzător.
O cromatogramă diferențială este o cromatogramă obținută de un detector diferențial. Aceste detectoare includ, de exemplu, spectrofotometre și detectoare de modificări ale conductivității electrice..
Acest tip de cromatogramă a arătat rezultatul separării anionilor dintr-o probă, detectată prin fotometrie indirectă. Aceleași rezultate au fost obținute și pentru studiul ionilor, de exemplu, cu detectarea finală prin conductimetrie..
Graficul superior arată exemplul unei cromatograme diferențiale, obținută prin secvențieri automate ADN (acid dezoxiribonucleic). Graficul arată clar vârfuri de patru culori, câte o culoare pentru fiecare dintre bazele azotate din ADN..
Prin sprijinul unui program computerizat, se facilitează interpretarea secvenței bazelor ADN-ului analizat, precum și pentru analiții mai complexi.
Cromatograma integrală corespunde cu cea obținută de un detector integral. Această cromatogramă arată ieșirea unei singure componente în studiu. Nu se obțin vârfuri multiple ca în diferențial.
În cromatograma integrală, se obține o înregistrare cu o formă descrisă ca un pas. Această formă este porțiunea cromatogramei care corespunde cantității unei singure substanțe care părăsește coloana..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.