mediu OF sau agar de fermentare a glucozei este un agar semisolid special conceput pentru studiul metabolismului oxidativ și fermentativ al glucidelor într-un grup important de microorganisme, altele decât Enterobacteriaceae, numite bacili Gram negativi non-enterici.
A fost creat de Hugh și Leifson; acești cercetători și-au dat seama că mijloacele convenționale de studiu a producției de acid din carbohidrați nu erau potrivite pentru acest grup specific de bacterii.
Acest lucru se datorează faptului că tijele Gram negative non-enterice produc în general cantități mici de acizi, spre deosebire de Enterobacteriaceae..
În acest sens, mediul OF are caracteristici speciale care pot detecta cantitățile mici de acid formate, atât pe căi oxidative, cât și pe cale fermentativă. Aceste diferențe sunt legate de cantitatea de peptoni, carbohidrați și agar..
Acest mediu conține mai puțini peptoni și o concentrație mai mare de carbohidrați, reducând astfel produsele care alcalinizează mediul ca urmare a metabolismului proteinelor și crește producția de acizi datorită utilizării carbohidraților..
Pe de altă parte, scăderea cantității de agar favorizează diseminarea acidului produs în mediu, pe lângă faptul că ne permite să observăm motilitatea.
Mediul OF este compus din peptonă, clorură de sodiu, albastru de bromotimol, fosfat dipotasic, agar și un carbohidrat. Cel mai frecvent glucid este glucoza, dar pot fi folosiți alții în funcție de cel pe care doriți să-l studiați, cum ar fi lactoza, maltoza, xiloza, printre altele..
Indice articol
Ca orice mediu de cultură, mediul OF trebuie să conțină substanțe nutritive care garantează creșterea bacteriană; aceste substanțe sunt peptoni.
La rândul său, carbohidrații furnizează energie și, în același timp, servește la studierea comportamentului microorganismului împotriva acestuia, adică permite clasificarea bacteriilor ca un organism oxidativ, fermentativ sau non-zahararolitic..
Mediul OF conține un raport peptonă / carbohidrat 1: 5 spre deosebire de mediul convențional 2: 1. Aceasta asigură faptul că cantitatea de amine alcaline formate din degradarea peptonelor nu neutralizează formarea acizilor slabi..
Pe de altă parte, mediul conține clorură de sodiu și fosfat dipotasic. Acești compuși stabilizează osmotic mediul și, respectiv, reglează pH-ul. Albastrul de bromotimol este indicatorul pH-ului, care transformă culoarea mediului din verde în galben cu producția de acid..
Unele microorganisme pot utiliza carbohidrați prin căile oxidative sau de fermentare, în timp ce altele nu iau niciuna dintre cele două căi..
Acest lucru depinde de caracteristicile fiecărui microorganism. De exemplu, unele microorganisme aerobe stricte pot oxida anumiți carbohidrați, iar anaerobii facultativi pot oxida și fermenta în funcție de mediul înconjurător, în timp ce altele nu oxidează sau fermentează carbohidrații (asacarolitici).
În cele din urmă, există o modificare a mediului OF recomandată de CDC care conține o bază OF specială cu fenol roșu ca indicator..
Procesul de oxidare a glucozei nu necesită fosforilarea glucozei, la fel ca procesul de fermentare. În acest caz, gruparea aldehidă este oxidată la o grupare carboxil, rezultând acid gluconic. La rândul său, acesta este oxidat la 2-ketogluconic.
Acesta din urmă fie se acumulează, fie se descompune în două molecule de acid piruvic. Acest sistem necesită prezența oxigenului sau a unui compus anorganic ca acceptor final de electroni..
Producția de acizi pe această cale este mai slabă decât cea obținută pe calea fermentației.
Pentru ca fermentarea glucozei să aibă loc pe oricare dintre căile disponibile, trebuie mai întâi fosforilată, devenind glucoză-6-fosfat.
Fermentarea glucozei poate lua mai multe căi, cea principală este ruta Embden-Meyerhof-Parnas, dar pot lua și calea Entner-Doudoroff sau calea Warburg-Dickens hexoz monofosfat, cunoscută și sub denumirea de degradarea pentozelor.
Traseul ales va depinde de sistemul enzimatic pe care îl posedă microorganismul..
În fermentarea glucozei pe calea Embden-Meyerhof-Parnas, aceasta este împărțită în două molecule de trioză, pentru a fi apoi degradată în diverși compuși de carbon, până la formarea gliceraldehidei-3-fosfatului. De acolo provine o substanță intermediară, care este acidul piruvic..
De acolo, se vor forma diferite tipuri de acizi amestecați care pot varia de la o specie la alta..
Acest sistem apare în absența oxigenului și necesită un compus organic ca acceptor final de electroni..
În fermentarea glucozei prin calea Entner-Doudoroff, glucoza 6-fosfat devine glucono-ᵼ-lactonă-6-fosfat și de acolo este oxidată la 6-fosfogluconat și 2-ceto-3-deoxi-6-fosfogluconat, la în cele din urmă formează acid piruvic. Această cale necesită oxigen pentru ca glicoliza să apară.
Acest traseu este un hibrid al celor 2 anterioare. Începe similar cu calea Entner-Doudoroff, dar ulterior gliceraldehida-3-fosfatul se formează ca un precursor al acidului piruvic, așa cum se întâmplă în calea Embden-Meyerhof-Parnas..
Cântărește:
2 g de peptonă
5 g clorură de sodiu
10 g de D-glucoză (sau carbohidratul care trebuie preparat)
0,03 g albastru de bromotimol
3 gr de agar
0,30 g fosfat dipotasic
1 litru de apă distilată.
Se amestecă toți compușii cu excepția carbohidraților și se dizolvă în 1 litru de apă distilată. Se încălzește și se agită până se dizolvă complet.
La răcire la 50 ° C, adăugați 100 ml de glucoză 10% (filtrat).
Distribuie aseptic 5 ml de mediu OF în eprubete cu bumbac și autoclavează la 121 ° C, 15 kilograme de presiune timp de 15 minute.
Să se solidifice în poziție verticală.
PH-ul mediului trebuie să fie de 7.1 Culoarea mediului preparat este verde.
A se păstra la frigider.
Mediul OF este un mediu special pentru determinarea comportamentului metabolic al unui microorganism împotriva unui carbohidrat. Mai ales pentru cei care formează acizi puțini, slabi sau deloc.
Pentru fiecare microorganism, sunt necesare 2 tuburi OF, ambele trebuie inoculate cu microorganismul care urmează să fie studiat. Colonia este luată cu un mâner drept și se face o puncție în centrul tubului fără a ajunge în fund; se pot face mai multe puncții, atâta timp cât nu există interes în observarea motilității.
Un strat de petrolat lichid steril sau parafină topită sterilă (aproximativ 1 până la 2 ml) se adaugă la unul dintre tuburi și este etichetat cu litera „F”. Celălalt tub este lăsat original și este etichetat cu litera „O”. Ambele tuburi sunt incubate la 35 ° C și observate zilnic timp de până la 3 până la 4 zile..
Tabel: Clasificarea microorganismelor în funcție de comportamentul lor în tuburi deschise (oxidative) și închise (fermentative) OF
Gazul este observat odată cu formarea de bule sau deplasarea agarului.
Trebuie remarcat faptul că un organism care oxidează doar glucoza, dar nu o fermentează, nu va putea fermenta nici alți carbohidrați, în niciun caz doar o va oxida. Prin urmare, în această situație, tubul etanș pentru studiul altor carbohidrați va fi omis..
În plus, motilitatea poate fi văzută în mediul OF.
Motilitate pozitivă: creștere care nu se limitează la zona de inoculare. Există o creștere către părțile laterale ale tubului.
Motilitate negativă: creșterea numai în inoculul inițial.
Următoarele tulpini pot fi utilizate ca controale de calitate: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa Da Moraxella sp. Rezultatele așteptate sunt:
-Unele microorganisme nu pot crește în mediu OF. În aceste cazuri, testul se repetă, dar la mediu se adaugă 2% ser sau 0,1% extract de drojdie..
-Reacțiile de oxidare sunt adesea observate doar aproape de suprafață, iar restul mediului poate rămâne verde, în același mod în care este considerat pozitiv.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.