bile esculin agar Este un mediu de cultură solid selectiv și diferențial. Este utilizat ca test de diagnostic pentru a determina capacitatea unui anumit microorganism de a crește într-un mediu care conține bilă și, de asemenea, descompune glucozida esculină în esculetină și glucoză..
Acest test de diagnostic este utilizat pentru a diferenția speciile din genul Streptococcus aparținând grupei D (esculină biliară pozitivă), de alte grupuri de Streptococcus care reacționează negativ la acest test..
Trebuie remarcat faptul că unii streptococi din grupul viridans pot hidroliza esculina, dar nu sunt capabili să crească în prezența bilei la o concentrație de 40%, prin urmare, în acest mediu, reacția pentru acest grup este negativă.
Pe de altă parte, mediul esculinic biliar este, de asemenea, util pentru diagnosticarea Listeria monocytogenes sau specii de Aerococcus sp, întrucât aceste microorganisme sunt biliare esculin pozitive.
Agarul biliar de esculină este compus din peptonă, extract de carne, bilă de bou, esculină, citrat de fier, agar și apă distilată. Unele case comerciale includ azidă de sodiu în compoziția mediului.
Mediul poate fi preparat în laborator dacă aveți toți compușii separat sau poate fi preparat din mediul comercial deshidratat..
Indice articol
Mediul esculinic biliar conține peptoni și extract de carne, ambii compuși furnizează substanțele nutritive necesare pentru dezvoltarea microorganismelor.
De asemenea, conține esculină; Acest compus este un glucozid format prin unirea unei monozaharide simple (glucoza) cu un compus numit 6,7-dihidroxicomarină sau esculetină (agluconă), legat printr-o legătură acetal sau glucozidică..
Testul se bazează pe demonstrarea faptului dacă bacteriile sunt capabile să hidrolizeze esculina. Dacă se întâmplă acest lucru, esculina se descompune în esculetină și glucoză. Esculetina reacționează cu fierul prezent în mediu, formând un compus maro închis, aproape negru.
Aceasta înseamnă că citratul feric acționează ca un dezvoltator de reacție. Această caracteristică face ca agarul esculinei biliare să fie un mediu diferențial..
La rândul său, bila este un inhibitor care împiedică creșterea unor microorganisme, prin urmare, bacteriile, înainte de a diviza esculina, trebuie să poată crește în prezența bilei. Prin urmare, acest mediu este considerat selectiv.
Bacteriile care se pot dezvolta în acest mediu sunt în principal cele care trăiesc în mediul intestinal.
În acest sens, unele companii comerciale adaugă azidă de sodiu în mediu pentru a inhiba în continuare creșterea bacililor enter negativi Gram, crescând selectivitatea mediului pentru creșterea streptococului..
În cele din urmă, agarul conferă consistenței solide mediului, iar apa este solventul compușilor..
Cântărește:
5 g peptones
3 g extract de carne
40 g bilă de vită
1 g de esculină
0,5 g de citrat de fier
15 g agar
1000 ml apă distilată
În cazul adăugării de azidă de sodiu, cântăriți 0,25 g / litru și adăugați la amestec.
Se dizolvă componentele în litrul de apă distilată, se încălzește până când compușii se dizolvă complet. Distribuiți 5 ml în eprubete cu capac cu șurub de 16 x 125 mm. Autoclavă la 121 ° C, presiune de 15 kilograme timp de 15 minute.
Scoateți din autoclavă și înclinați tuburile pe un suport, astfel încât agarul să se solidifice într-un cioc de flaut larg.
A se păstra la frigider până la utilizare. Aduceți la temperatura camerei înainte de însămânțare.
Se pot prepara și plăci de agar cu esculină biliară; în acest caz, întregul amestec este autoclavizat într-un balon și apoi distribuit în cutii Petri sterile. Se lasă să se solidifice și se păstrează la frigider..
PH-ul mediului trebuie să fie de 6,6 ± 0,2.
Se cântărește suma specificată de insert. Acest lucru poate varia de la o casă de afaceri la alta. Ulterior, continuați la fel ca procedura explicată mai sus.
PH-ul mediului trebuie să fie de 6,6 ± 0,2. Culoarea mediului deshidratat este bej deschis, iar mediul preparat este chihlimbar închis.
Mediul de esculină biliară este utilizat în principal pentru a diferenția streptococul grupului D (esculină biliară pozitivă), de restul grupurilor de streptococi (esculin biliar negativ).
Combinarea testului de creștere a bulionului hipersaltat cu testul esculinei biliare poate fi utilizată pentru a identifica un grup special al grupului D Streptococcus numit Enterococcus.
Acest grup special de streptococi aparține grupului D din genul menționat și sunt capabili să hidrolizeze esculina în prezența bilei, la fel ca și restul membrilor grupului D, dar sunt, de asemenea, capabili să se dezvolte într-un mediu hipersaltat (BHI cu clorură de sodiu 6,5%), o proprietate care face diferența.
Prin urmare, streptococii care hidrolizează bila esculinică, dar care nu cresc în bulion hipersaltat, se numesc streptococi de grup D non-enterococi..
Se inoculează mediul de preferință dintr-un bulion pur Todd-Hewitt de 24 de ore.
Adăugați 2 picături la suprafața mediului cu o pipetă Pasteur și răspândiți în mediu cu o buclă de platină..
Incubați la 35 ° C timp de 48 de ore, în timp ce timpul de incubație este îndeplinit, poate fi monitorizat pentru a vedea dacă există o reacție pozitivă. Dacă la sfârșitul timpului reacția rămâne negativă, poate fi incubată până la 72 de ore.
Reacție pozitivă: Aspectul unei culoare maro închis, aproape negru în ciocul flautului (în cazul testului tubului) sau înnegrirea agarului din jurul coloniilor (în cazul testului plăcii).
Reacție negativă: nu apare înnegrirea mediului sau negru în mai puțin de jumătate din tub după 72 de ore de incubație. Pe de altă parte, creșterea bacteriană în mediu fără apariția culorii negre ar trebui considerată un test negativ..
Pentru a evalua calitatea mediului, o tulpină de Enterococcus faecalis ATCC 29212 ca martor pozitiv și o tulpină Streptocococus care nu aparține grupului D ca martor negativ.
-Mediile care nu conțin azidă de sodiu permit creșterea tijelor enter negative Gram. Unele dintre ele pot înnegri mijlocul.
- Unele case comerciale adaugă o concentrație scăzută de bilă (10%) și din acest motiv unii streptococi care nu aparțin grupei D se pot dezvolta în mediu și hidrolizează esculina, ceea ce poate genera erori în interpretare..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.