agar de sânge este un mediu de cultură solid îmbogățit, diferențial, dar neselectiv. Este utilizat pentru recuperarea și creșterea unei mari varietăți de microorganisme din probe clinice sau pentru subculturi..
Agarul de sânge clasic trebuie inclus pentru însămânțarea majorității probelor clinice primite în laborator; cu excepția probelor de scaun în care nu este util, cu excepția cazului în care sunt pregătite cu anumite modificări.
Acest mediu de cultură este alcătuit practic dintr-un agar de bază îmbogățit și 5% sânge. Baza de agar poate varia în funcție de necesități, dar va fi compusă în principal din peptoni, aminoacizi, vitamine, extract de carne, clorură de sodiu, agar, printre altele..
În ceea ce privește sângele, este necesar în mod normal să aveți contact cu un vivariu pentru a obține sânge de la animale, cum ar fi oaie, iepure sau cal. Cu toate acestea, acest lucru nu este întotdeauna posibil, iar sângele uman este uneori folosit..
Mediul de agar din sânge poate fi preparat în laborator sau poate fi achiziționat gata făcut de la companii dedicate. Pregătirea acestui mediu este una dintre cele mai delicate, orice neglijență în prepararea sa va avea ca rezultat un lot contaminat.
Acesta este motivul pentru care trebuie luate toate măsurile de precauție posibile și, în final, trebuie efectuat un control al calității incubând la 37 ° C 1 placă pentru fiecare 100 care sunt pregătite.
Indice articol
Agarul din sânge este un mediu îmbogățit, deoarece conține 5-10% sânge pe o bază de agar ca aditiv principal. Ambii compuși conțin mulți nutrienți și această proprietate permite creșterii în ea a majorității bacteriilor cultivabile..
Această creștere are loc fără restricții; din acest motiv este neselectiv. Cu toate acestea, dacă se adaugă compuși la acest mediu care împiedică dezvoltarea unor microorganisme și favorizează cel al altora, acesta devine selectiv. Acesta este cazul dacă se adaugă anumite tipuri de antibiotice sau antifungice.
De asemenea, agarul de sânge este un mediu diferențial, deoarece ne permite să distingem 3 tipuri de bacterii: beta-hemolitice, alfa-hemolitice și gamma-hemolitice..
Beta-hemoliticele sunt cele care au capacitatea de a liza complet sau de a sparge celulele roșii din sânge, formând un halo limpede în jurul coloniilor, prin urmare produc ß sau ß-hemoliză, iar microorganismele sunt numite ß-hemolitice..
Exemple de bacterii ß-hemolitice sunt Streptococcus pyogenes Da Streptococcus agalactiae.
Alfa-hemoliticele sunt cele care efectuează hemoliza parțială, în care hemoglobina este oxidată în methemoglobină, generând o colorație verzuie în jurul coloniilor. Acest fenomen este cunoscut sub numele de α-hemoliză sau α-hemoliză, iar bacteriile sunt clasificate ca α-hemolitice..
Exemple de bacterii α-hemolitice sunt Streptococcus pneumoniae Da streptococ a grupului viridans.
În cele din urmă, există așa-numitele bacterii gamma-hemolitice sau nehemolitice. Acestea cresc pe agar fără a genera modificări asupra acestuia, efect cunoscut sub numele de γ-hemoliză, iar microorganismele sunt γ-hemolitice.
Exemplu de bacterii γ-hemolitice: unele tulpini din grupul D Streptococcus (Streptococcus bovis și Enterococcus faecalis).
Mediul de cultură cu agar din sânge este unul dintre cele mai frecvent utilizate în laboratorul de microbiologie..
Printre microorganismele capabile să crească în mediul agar din sânge se numără: bacterii stricte aerobe, facultative, microaerofile, anaerobe, Gram pozitive sau Gram negative, bacterii cu creștere rapidă sau cu creștere lentă.
Se dezvoltă, de asemenea, unele bacterii care necesită nutriție sau fastidioase, precum și ciuperci și drojdii. De asemenea, este util să se efectueze subculturi sau să se reactiveze tulpini care sunt foarte slabe din punct de vedere metabolic..
Cu toate acestea, alegerea grupei de sânge și a agarului de bază va varia în funcție de microorganismul probabil suspectat de recuperare și de utilizarea care va fi dată plăcii (cultură sau antibiogramă)..
Sângele poate fi miel, iepure, cal sau om.
Cel mai recomandat este sângele de miel, cu unele excepții. De exemplu, pentru a izola speciile Haemophilus, unde sângele recomandat este sângele de cal sau de iepure, deoarece sângele de miel are enzime care inhibă factorul V.
Cel mai puțin recomandat este uman, cu toate acestea este cel mai folosit, poate pentru că este cel mai ușor de obținut.
Sângele trebuie defibrinat, obținut fără niciun tip de aditiv și de la animale sănătoase. Pentru utilizarea sângelui uman, trebuie luați în considerare mai mulți factori:
Dacă sângele provine de la persoane care au avut infecții bacteriene, vor avea anticorpi specifici. În aceste condiții, creșterea unor bacterii este probabil să fie inhibată..
Dacă este obținut din banca de sânge, conține citrat și este posibil ca anumite bacterii să nu crească în prezența sa. Pe de altă parte, dacă sângele provine de la pacienții care iau antibiotice, creșterea bacteriilor sensibile poate fi inhibată..
Și dacă sângele provine de la o persoană cu diabet zaharat, excesul de glucoză interferează cu dezvoltarea corectă a modelelor de hemoliză.
Agarul de bază utilizat pentru prepararea agarului de sânge poate fi foarte larg. Printre acestea se numără: agar nutritiv, agar de infuzie a inimii creierului, agar de soia tripticază, agar Müeller Hinton, agar Thayer Martin, agar Columbia, agar Brucella, agar Campylobacter etc..
Această bază este cea mai puțin utilizată, deoarece va crește în principal bacterii neexigente, cum ar fi bacilii enterici., Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, printre alții. Nu se recomandă izolarea streptococului.
Este unul dintre cele mai utilizate ca bază de agar din sânge, deoarece are substanțele nutritive necesare pentru creșterea majorității bacteriilor, inclusiv Streptococ sp și alte bacterii fastidioase. Deși nu este potrivit pentru observarea modelelor de hemoliză.
Sângele de miel este în general utilizat cu această bază.
Pot fi preparate și variante de agar din sânge, unde se adaugă alți compuși pentru izolarea anumitor microorganisme. De exemplu, agarul pentru infuzie cardiacă din creier suplimentat cu sânge de iepure, cistină și glucoză, servește la izolare Francisella tularensis.
În timp ce, cu telurit de cistină, este util pentru izolarea Corynebacterium diphteriae. Se poate folosi sânge uman sau de miel.
Cu prima beta-hemoliză va fi văzută ca un halou îngust, în timp ce cu al doilea halou va fi mult mai larg.
De asemenea, această bază, împreună cu bacitracină, amidon de porumb, sânge de cal și alte suplimente de îmbogățire (IsoVitaleX), este utilizată pentru izolarea genului Haemophilus sp din probe respiratorii.
De asemenea, dacă se adaugă combinația de antibiotice cloramfenicol - gentamicină sau penicilină - streptomicină cu sânge de cal, este ideală pentru izolarea ciupercilor patogene solicitante, chiar și cu un randament mai mare decât Sabouraud glucoză agar. Este deosebit de util în izolare Histoplasma capsulatum.
Această bază este cea mai recomandată pentru o mai bună observare a modelului de hemoliză și pentru efectuarea testelor de diagnostic, cum ar fi taxonii optoquinilor și bacitracina. Este clasicul agar de sânge care este utilizat în mod obișnuit.
Cu această bază puteți pregăti și agarul de sânge special pentru Corynebacterium diphteriae, cu telurit de cistină Da sânge de miel.
La fel, combinația acestui agar cu sângele de miel, plus kanamicină-vancomicină este ideală pentru creșterea anaerobilor, în special Bacteroides sp.
Această bază suplimentată cu sânge este utilizată pentru a efectua antibiograma microorganismelor solicitante, cum ar fi Streptococ sp.
Este, de asemenea, util pentru izolarea bacteriilor, cum ar fi Legionella pneumophila.
Acest mediu este ideal ca bază pentru agar de sânge atunci când genul Neisseria este suspectat, în special Neisseria meningitidis, la fel de N. gonorrhoeae nu crește pe agar de sânge.
De asemenea, este utilizat pentru a efectua teste de sensibilitate la Neisseria meningitidis.
Această bază este excelentă pentru însămânțarea specimenelor de biopsie gastrică pentru Helicobacter pylori.
Mediul este preparat prin adăugarea a 7% sânge de miel defibrinat cu antibiotice (vancomicină, trimetoprim, amfotericină B și cefsulodină) pentru a restricționa creșterea altor tipuri de bacterii care pot fi prezente..
Aceeași bază suplimentată cu sânge uman sau de miel, acid nalidixic și colistină este utilă pentru a izola Gardnerella vaginalis. De asemenea, ideal pentru evaluarea susceptibilității antimicrobiene la antibiotice ale aceluiași microorganism.
În plus, este utilizat pentru prepararea agarului de sânge pentru cultivarea anaerobilor, adăugând aminoglicozide și vancomicină..
Această bază vă permite să observați în mod corespunzător modelele de hemoliză.
Acest mediu utilizat ca bază pentru agar de sânge împreună cu adăugarea de vitamina K este ideal pentru cultivarea bacteriilor anaerobe. În acest caz, se recomandă utilizarea sângelui de miel..
Agarul Campylobacter suplimentat cu 5% sânge de oaie și 5 antibiotice (cefalotină, amfotericină B, trimetoprim, polimixină B și vancomicină), este mediul utilizat pentru izolarea Campylobacter jejuni în probe de scaun.
Fiecare casă comercială aduce instrucțiunile pentru a pregăti un litru de mediu de cultură pe spatele recipientului. Calculele corespunzătoare pot fi făcute pentru a pregăti cantitatea dorită, în funcție de agarul de bază selectat.
Agarul de bază este deshidratat (pulbere), de aceea trebuie dizolvat în apă distilată ajustată la pH 7,3.
Cantitatea indicată de agarul de bază ales este cântărită și dizolvată în cantitatea corespunzătoare de apă într-un balon, apoi încălzită la căldură moderată și amestecată cu mișcări rotative până când toată pulberea este dizolvată..
Odată dizolvat, sterilizați într-o autoclavă la 121 ° C timp de 20 de minute.
La ieșirea din autoclavă, balonul este lăsat să se răcească până când temperatura oscilează între 40 și 50 ° C; Este o temperatură pe care pielea umană o susține și, în același timp, agarul nu s-a solidificat încă.
Pentru a face acest lucru, balonul este atins cu mâna și dacă căldura este tolerabilă, este temperatura ideală pentru a adăuga cantitatea corespunzătoare de sânge defibrinat (50 ml pentru fiecare litru de agar). Se amestecă ușor pentru a se omogeniza.
Trecerea agregării de sânge este crucială, deoarece dacă se face atunci când mediul este foarte fierbinte, celulele roșii din sânge se vor descompune și mediul nu va servi pentru a observa hemoliza.
Dacă se adaugă prea rece, se vor forma bulgări și suprafața suportului nu va fi netedă pentru a permite punctarea corectă..
Se servește în cutii Petri sterile imediat după omogenizarea sângelui. Aproximativ 20 ml se toarnă în fiecare cutie Petri. Această procedură se efectuează într-o hota cu flux laminar sau lângă arzător.
La servirea agarului de sânge în vasele Petri, nu trebuie să rămână bule de aer pe suprafața plăcii. Dacă se întâmplă acest lucru, flacăra arzătorului Bunsen este trecută rapid peste placă pentru a le elimina..
Plăcile se lasă să se solidifice și se depozitează la frigider (2-8 ° C) inversate până la utilizare. Înainte de a utiliza plăcile de agar din sânge, acestea trebuie temperate (lăsate să atingă temperatura camerei) pentru a putea fi semănate..
Plăcile preparate durează aproximativ 1 săptămână.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.