bulion de malonat Este mediul de cultură lichid utilizat pentru testul de diagnostic (testul malonat), utilizat pentru a diferenția unele genuri din familia Enterobacteriaceae. A fost creat de Leifson în 1933 și ulterior modificat de Ewing, care a adăugat o formulă originală cu o cantitate mică de dextroză și extract de drojdie..
Mediul este compus în prezent din extract de drojdie, sulfat de amoniu, fosfat dipotasic, fosfat monopotassic, clorură de sodiu, malonat de sodiu, dextroză și albastru de bromotimol. Acest test este, în general, inclus în bateria de identificare biochimică pentru Enterobacteriaceae, ajutând la diferențierea anumitor genuri și specii..
Testul malonatului se bazează în principal pe capacitatea unor microorganisme de a folosi malonatul de sodiu ca singură sursă de carbon și sulfatul de amoniu ca sursă de azot..
Testul malonatului este de obicei pozitiv la unele specii din genurile Enterobacter, Klebsiella și Citrobacter. În timp ce majoritatea speciilor din genurile Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus și Providencia, dau reacții negative.
Indice articol
Testul malonatului constă în arătarea acelor bacterii care sunt capabile să utilizeze malonatul de sodiu ca singură sursă de carbon și sulfatul de amoniu ca sursă de azot..
Cele mai multe enterobacteriacee care nu utilizează malonat sunt capabile să crească în acest mediu, luând dextroză și extract de drojdie ca nutrienți..
În acest caz, orice încercare de alcalinizare prin utilizarea peptonelor va fi contracarată de producerea acizilor generați prin fermentarea dextrozei. De asemenea, fosfații dipotasi și monopotasi acționează ca un tampon, menținând pH-ul la 6,7.
De aceea, atunci când testul este negativ, bulionul rămâne aceeași culoare originală (verde). În rare ocazii, mediul poate deveni acid datorită fermentării cu dextroză; fără utilizarea peptonelor și a indicatorului pH-ul ar transforma culoarea mediului în galben. Pentru ca acest lucru să se întâmple, pH-ul trebuie să scadă la 6.
Acum, când acest test este pozitiv, se spune că microorganismul a folosit malonat și sulfat de amoniu ca surse de carbon și respectiv azot, fără a utiliza celelalte componente..
În acest caz, mediul devine alcalin datorită eliberării de sodiu și formării consecvente de NaOH. În acest sens, indicatorul pH-ului (albastru bromotimol) transformă culoarea mediului de la verde la albastru atunci când pH-ul este egal sau mai mare de 7,6. Albastrul poate fi deschis sau intens (albastru prusac).
În cele din urmă, clorura de sodiu menține osmolaritatea mediului, iar apa este diluantul tuturor componentelor..
Bulion de aceeași culoare (verde) - Test negativ
Bulion galben: test negativ
Bulion albastru deschis sau intens: test pozitiv
Există o variantă numită bulion de malonat de fenilalanină, numită și mediu Shaw și Clarke. În acest caz, pot fi analizate două teste, utilizarea malonatului ca sursă de carbon și producerea de acid piruvic din fenilalanină..
Se cântărește numărul de grame specificat de inserția societății comerciale alese (poate varia de la una la alta). Gramele cântărite sunt suspendate într-un litru de apă distilată. Se încălzește ușor până se dizolvă complet. Distribuiți 3 ml de mediu în eprubete 13/100 cu capace de bumbac..
Sterilizați în autoclavă la 121 ° C timp de 15 până la 20 de minute.
Se răcește înainte de utilizare. Dacă nu vor fi utilizate imediat, păstrați-le la frigider până la utilizare. Aduceți bulionele la temperatura camerei înainte de inoculare.
PH-ul mediului trebuie să fie de 6,7 ± 0,2. Culoarea mediului preparat este verde sticla.
Se cântăresc 11 g de mediu deshidratat și se dizolvă în 1 litru de apă distilată. Restul preparatului este același cu cel descris anterior.
De asemenea, poate fi preparat prin adăugarea a 2 g / L de fenilalanină la mediul de bulion de malonat înainte de a fi sterilizat..
Este utilizat ca parte a bateriei de teste biochimice care sunt asamblate pentru identificarea bacteriilor din familia Enterobacteriaceae.
Ajută la distincția dintre:
-Genul Klebsiella și Enterobacter (+) din genul Escherichia și Serratia (-).
-Specia de Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salam și Salmonella enterica ssp diarizonae (+), a speciei Salmonella enterica ssp enterica (-).
-Din genul Klebsiella de obicei (+) din genul Actinobacillus (-).
-Uneori poate ajuta la diferențierea genurilor și speciilor de bacterii care nu aparțin familiei Enterobacteriaceae, cum ar fi printre tijele Gram negative care nu fermentează. Alcaligenes faecalis (+) și Acinetobacter sp (-).
Sub o brichetă, se ia o porție de apă de colonie pură, utilizând un mâner de platină sterilizat și răcit corespunzător. Proba prelevată (inocul ușor) este dizolvată în bulionul de malonat. Se incubează cu capacul liber în aerobioză la 35 ° C ± 0,2 timp de 24 până la 48 de ore.
Bulionul de malonat poate fi, de asemenea, inoculat dintr-o cultură de 18-24 de ore în bulion de soia tripticază. În acest caz, se iau 0,01 ml cu o pipetă sterilă și se inoculează bulionul de malonat. Se incubează cu capacul liber în aerobioză la 35 ° C ± 0,2 timp de 24 până la 48 de ore.
La sfârșitul timpului, rezultatele sunt interpretate. Orice urmă de culoare albastră după 48 de ore de incubație trebuie considerată pozitivă. Testul nu trebuie interpretat ca fiind negativ până la expirarea timpului de incubație de 48 de ore..
În cazul utilizării variantei de bulion de malonat de fenilalanină, malonatul este mai întâi interpretat și apoi se adaugă 5 picături de HCI 1N și 3-5 picături de clorură ferică 8%. O culoare verde închis este interpretată ca un test pozitiv pentru fenilalanină. Dacă, dimpotrivă, mediul devine albastru pal, testul este negativ pentru fenilalanină..
Pentru a efectua controlul sterilității mediului, unul sau două bulionuri trebuie incubate la 35 ° C ± 0,2 timp de 24 de ore de incubare. După acest timp, nu ar trebui să existe nori sau schimbări de culoare.
Tulpinile cunoscute sau certificate pot fi utilizate pentru controlul calității, cum ar fi: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 și Escherichia coli ATCC 25922.
Rezultatele așteptate sunt:
Nu utilizați bulion care prezintă turbiditate, precipitații, schimbări de culoare sau orice semn de deteriorare.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.