bulion de selenită Este un mediu de cultură lichid selectiv. A fost proiectat de Leifson pentru îmbogățirea probelor în care se suspectează prezența bacteriilor enteropatogene din genul Salmonella..
Acest mediu respectă cerințele Asociației Americane de Sănătate Publică (APHA) și, prin urmare, este acceptat pentru investigarea prezenței Salmonella în probe de scaun, urină, alimente lichide sau solide, apă, printre altele..
Compoziția sa chimică favorizează recuperarea acestor microorganisme și, la rândul său, inhibă creșterea altora. Este în primul rând toxic pentru majoritatea bacteriilor aparținând familiei Enterobacteriaceae. Cu toate acestea, permite și recuperarea tulpinilor Shigella și nu inhibă creșterea Pseudomonas și Proteus..
Este compus din hidrogen selenit de sodiu anhidru, fosfat de sodiu anhidru, peptoni și lactoză. Există, de asemenea, o variantă la care se adaugă cistină, de unde și denumirea de bulion de selenit-cistină..
În prezent, se preferă utilizarea bulionului de selenită-cistină, deoarece se obține un procent mai mare de recuperare a Salmonella, echivalent cu cel observat cu alte medii selective în același scop, cum ar fi bulionul de tetrationat de sodiu..
Indice articol
Peptonele conținute în bulion servesc drept nutrienți pentru dezvoltarea corectă a microorganismelor. Tulpinile de Salmonella folosesc peptonele ca sursă de azot, vitamine și aminoacizi.
Lactoza este glucidul fermentabil, în timp ce selenitul de sodiu este substanța inhibitoare care oprește dezvoltarea bacteriilor Gram pozitive și a majorității bacteriilor prezente în flora intestinală, în special a celor din familia Enterobacteriaceae. Fosfatul de sodiu este tamponul care stabilizează pH-ul mediului.
În cazul variantei de bulion de selenită care conține L-cistină, acest compus suplimentar este un agent reducător care minimizează toxicitatea selenitei, crescând recuperarea Salmonella..
Dacă aveți componentele amestecului, puteți cântări:
4 g hidrogen selenit de sodiu anhidru.
10 g de fosfat de sodiu anhidru.
5 grame de peptones.
4 g lactoză.
Se dizolvă compușii în 1 litru de apă distilată sterilă. Poate fi încălzit ușor pentru a se dizolva complet.
Unele laboratoare expun mediul timp de 10 minute în abur fluent pentru a-l steriliza, deoarece nu ar trebui folosită o autoclavă. Dacă mediul este sterilizat, acesta poate fi păstrat la frigider până la utilizare..
De asemenea, poate fi preparat nesteril și servit direct de la 10 la 15 ml în eprubete sterile.
În acest caz, trebuie lăsat să se odihnească și să se utilizeze imediat. Deoarece mediul nu este steril, nu poate fi păstrat în frigider pentru utilizare ulterioară..
Dacă mediul comercial este disponibil, cântăriți 23 g de mediu deshidratat și dizolvați-l într-un litru de apă distilată sterilă. Se încălzește scurt pentru a termina dizolvarea. Nu faceți autoclavă. Serviți aseptic 10 sau 15 ml în eprubete sterile.
PH-ul final al mediului trebuie să fie de 7,0 ± 0,2.
Trebuie remarcat faptul că culoarea mediului deshidratat este bej și preparatul este de culoare chihlimbară ușoară și translucidă..
Conține aceiași compuși ca bulionul de selenită, dar se adaugă 10 mg de cistină. Restul procedurii este exact la fel ca cel descris mai sus.
Acest mediu este special pentru a fi utilizat în studii epidemiologice, în cazurile în care boala nu se află în stadiul său acut, pacienți asimptomatici sau purtători sănătoși.
Izolarea genului Salmonella este, în general, dificilă, deoarece acestea sunt în mod normal doar probe slab contaminante. Fiind în cantități puține, este ușor suprapus de creșterea altor genuri bacteriene care se găsesc în cantitate mai mare..
Pe de altă parte, materia primă cu care sunt fabricate alimentele procesate sunt adesea expuse la căldură, procese de deshidratare, utilizarea dezinfectanților, radiații și conservanți, printre altele..
Prin urmare, salmonelele prezente în materia primă sunt abuzate prin supunerea produsului la procesele industriale menționate anterior. De asemenea, în cazul probelor clinice, cum ar fi fecalele, tulpinile pot fi slabe dacă provin de la pacienți care au fost tratați cu antibiotice..
Prin urmare, orice probă în care se suspectează prezența Salmonella ar trebui să fie pre-îmbogățită în bulion de lactoză și apoi îmbogățită în bulion de selenită pentru a-și optimiza recuperarea în medii selective, cum ar fi agar SS, agar xiloză, lizoxi deoxicolat (XLD), enteric Hektoen agar (HE) și agar verde strălucitor, printre altele.
Pentru probele de scaun, luați 1 g de probă și suspendați într-un tub cu 10 până la 15 ml de bulion de selenită. Dacă scaunele sunt lichide, luați 1 ml și suspendați-l în bulion. Pentru tampoane rectale, descărcați materialul tampon în bulion.
În probele alimentare solide se iau 1 gr și se suspendă în bulionul de selenită.
În alimentele lichide amestecați în părți egale cu bulionul de selenită la concentrație dublă.
Pentru probele de urină, centrifugați, aruncați supernatantul, luați tot sedimentul și suspendați-l în bulionul de selenită..
Bulionele sunt incubate la 37 ° C timp de 24 de ore de incubare. Creșterea bacteriană este evidențiată de turbiditate. Un tub suplimentar pe probă poate fi, de asemenea, inclus pentru incubare la 42 ° C. Ulterior, însămânțarea mediilor solide selective din bulionul de selenit.
Pentru controlul sterilității, un bulion de selenită din fiecare lot neinoculat este incubat la 37 ° C timp de 24 de ore. Nu este de așteptat turbiditatea sau schimbarea culorii mediului..
Pentru a controla buna funcționare a mediului, pot fi utilizate tulpini cunoscute, cum ar fi:
Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 și Proteus mirabilis ATCC 43071.
Rezultatele așteptate sunt:
Mediul de bulion de selenită este toxic pentru pielea umană, de aceea trebuie evitat contactul direct..
Nimeni nu a comentat acest articol încă.