bulion de tioglicolat Este un mediu de cultură îmbogățit cu o consistență fluidă. Este cunoscut sub acronimul FTM pentru acronimul său în engleză Fluid Thioglycollate Medium. A fost creat de Brewer și modificat în 1944 de Vera, care a adăugat peptonă de cazeină.
Acest mediu are un potențial redus de oxidare-reducere, prin urmare nu este recomandat pentru dezvoltarea bacteriilor aerobe stricte, dar este ideal pentru recuperarea bacteriilor aerobice facultative, anaerobe stricte și a bacteriilor microaerofile nesolicitate..
Performanța ridicată observată cu acest mediu în izolarea și recuperarea unei game largi de microorganisme a făcut ca acesta să fie acceptat de Farmacopeea Statelor Unite (USP), de Asociația Oficială a Chimiștilor Agricoli (AOAC) și de Farmacopeea Europeană (PE).
Aceste organizații îl recomandă pentru testarea controlului sterilității produselor farmaceutice și pentru îmbogățirea diferitelor tipuri de probe..
Tioglicolatul de cado este compus din extract de drojdie, digestie pancreatică de cazeină, dextroză anhidră, L-cistină, clorură de sodiu, tioglicolat de sodiu, resazurină și agar în cantitate mică.
Există mai multe versiuni ale acestui mediu, printre care se numără: bulion de tioglicolat cu indicator, bulion de tioglicolat fără indicator, bulion de tioglicolat cu indicator îmbogățit cu hemină și vitamina K1, și bulion de tioglicolat de carbonat de calciu.
Trebuie remarcat faptul că varianta de bulion de tioglicolat îmbogățit cu hemină și vitamina K servește pentru a spori creșterea anaerobilor fastidioși, iar varianta de bulion de tioglicolat care conține carbonat de calciu este utilă pentru a contracara acizii produși în timpul creșterii microbiene..
Indice articol
Bulionul de tioglicolat este considerat un mediu de îmbogățire neselectiv, deoarece permite creșterea majorității bacteriilor non-fastidioase. Cerințele nutriționale sunt asigurate de extractul de drojdie, digestia pancreatică și glucoza.
Pe de altă parte, acest mediu, deși este un bulion, conține o cantitate mică de agar; Aceasta înseamnă că are un potențial redus de oxidare-reducere, datorită faptului că încetinește intrarea oxigenului, în așa fel încât oxigenul scade pe măsură ce pătrunde mai adânc în tub..
De aceea acest mediu este ideal pentru dezvoltarea bacteriilor facultative aerobe, microaerofile și stricte anaerobe, acestea din urmă 2 fără a fi nevoie să se incubeze în aceste condiții. Același mediu reglează cantitatea de oxigen din mediu, fiind absent la baza tubului și în cantitate suficientă la suprafață..
De asemenea, tioglicolatul și L-cistina acționează ca agenți reducători, ajutând la prevenirea acumulării de substanțe dăunătoare dezvoltării bacteriene, cum ar fi peroxidul. În plus, acești compuși conțin grupări sulfhidril (-SH-), neutralizând efectele inhibitoare ale derivaților de mercur, arsenicale, printre alte metale grele..
La rândul său, resazurina este un indicator al reducerii oxidului. Această substanță este incoloră atunci când este redusă și roz când este oxidată. Există variante de bulion de tioglicolat cu indicatori și non-indicatori. Utilizarea acestuia va depinde de tipul probei și de preferința laboratorului..
Între timp, clorura de sodiu menține echilibrul osmotic al bulionului de tioglicolat și utilizarea glucozei sub formă anhidră previne excesul de umiditate în mediul deshidratat..
Se cântăresc 29,75 g de mediu deshidratat și se dizolvă în 1 litru de apă distilată. Amestecul este lăsat să stea timp de aproximativ 5 minute. Aduceți la o sursă de căldură și agitați frecvent până se dizolvă complet..
Se toarnă mediul în eprubete și se autoclavează la 121 ° C timp de 15 minute. Se lasă să se răcească înainte de utilizare. Verificați inserția casei comerciale pentru conservarea acesteia. Unii recomandă păstrarea la temperatura camerei într-un loc întunecat, iar alții într-un frigider ferit de lumină.
PH-ul mediului preparat este de 7,1 ± 0,2.
Culoarea mediului deshidratat este de culoare bej deschis, iar mediul preparat este de culoare chihlimbar deschis, cu oarecare opalescență..
Există mijloace comerciale care aduc deja hemină și vitamina K1, special pentru cultivarea anaerobilor.
Dacă mediul anaerob îmbogățit nu este disponibil, se poate prepara bulionul de bază de tioglicolat. Pentru aceasta, se adaugă 10 mg clorhidrat de hemină și 1 mg vitamina K.1 pentru fiecare litru de mediu. Cu toate acestea, dacă sângele sau serul se adaugă la bulionul de tioglicolat, nu este necesară adăugarea de hemină sau vitamina K..
Acesta este comercial și este pregătit urmând instrucțiunile de pe inserție.
Acesta are aceeași compoziție a tioglicolatului de bază, dar nu conține resazurină.
Se cântăresc 30 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Restul preparatului este același cu cel descris în bulionul de tioglicolat cu indicator.
Bulionul de tioglicolat este util pentru îmbogățirea probelor clinice, în special a celor provenite din situri sterile. Este, de asemenea, util pentru probe non-clinice, cum ar fi produse cosmetice, medicamente etc..
Pentru inocularea probelor lichide (cum ar fi LCR, lichid sinovial, printre altele), probele sunt mai întâi centrifugate și apoi se iau 2 picături de sediment și se plasează în bulionul de tioglicolat. Se incubează la 35 ° C timp de 24 de ore. Dacă în acest timp nu există creștere (turbiditate), incubați până la maximum 7 zile.
Dacă proba este prelevată cu un tampon, mediile de cultură sunt mai întâi inoculate în plăci și, în cele din urmă, tamponul este introdus în bulion, porțiunea proeminentă este împărțită și tubul este acoperit, lăsând tamponul în interior. Se incubează la 35 ° C timp de 24 de ore, maxim 7 zile.
Pentru probele solide, se omogenizează în soluție salină fiziologică (SSF) și apoi se inoculează bulionul de tioglicolat cu 2 picături de suspensie..
Uneori poate fi utilizat ca mediu de transport pentru probe în care se suspectează prezența anaerobilor stricți sau ca bulion de îmbogățire de rezervă..
Varianta de bulion de tioglicolat cu carbonat de calciu este utilizată pentru menținerea tulpinilor de control pentru o perioadă mai lungă de timp, deoarece are capacitatea de a neutraliza acizii produși prin utilizarea glucozei; acești acizi sunt toxici pentru anumite bacterii.
Creșterea bulionului de tioglicolat va fi observată de turbiditatea mediului. Se recomandă efectuarea unei colorări Gram și ulterior subcultură în medii neselective și selective, în funcție de tipul probei și de microorganismele suspectate..
Pentru controlul sterilității se recomandă incubarea unuia sau a două bulionuri fără inoculare. Rezultatul așteptat este un bulion clar, fără modificări de culoare, deși este normal să vezi o ușoară culoare roz pe suprafața tubului..
Pentru controlul calității, între 10 - 100 CFU de tulpini de control certificate trebuie inoculate, cum ar fi Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bacteroides vulgatus ATCC 8482.
Incubați la 30-35 ° C în aerobioză timp de 24 de ore până la maximum 3 zile, deoarece aceste microorganisme cresc rapid.
Se așteaptă o dezvoltare bună în toate cazurile, cu excepția Micrococcus luteus Da Bacillus subtilis, unde poate exista o dezvoltare moderată.
Pentru controlul calității bulionului de tioglicolat îmbogățit cu hemină și vitamina K1, pot fi utilizate tulpini de control Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 și Bacteroides fragilis ATCC 25285. Rezultatul așteptat este o creștere satisfăcătoare.
-Uneori, se observă că suprafața bulionului tioglicolat indicator devine roz; Acest lucru se datorează oxidării mediului. Dacă culoarea roz acoperă 30% sau mai mult din bulionul total, acesta poate fi încălzit într-o baie de apă timp de 5 minute, răcit din nou și utilizat..
Acest lucru va elimina oxigenul absorbit, readucând mediul în culoarea originală. Această procedură se poate face o singură dată.
-Pentru a îmbunătăți creșterea bacteriilor aerobe, ar trebui să fie incubat cu capacul ușor slăbit. Cu toate acestea, este de preferat să se utilizeze în acest scop un bulion de infuzie cardiacă sau un bulion de soia tripticază pentru dezvoltarea corectă a aerobilor stricți..
-Înghețarea mediului sau supraîncălzirea trebuie evitate, deoarece ambele condiții afectează mediul..
-Lumina directă dăunează mediului de cultură, acesta trebuie păstrat protejat de lumină.
Nimeni nu a comentat acest articol încă.