Motivarea și tehnicile colorării Kinyoun

2999
Anthony Golden
Motivarea și tehnicile colorării Kinyoun

Pata Kinyoun este o tehnică de colorare utilizată pentru colorarea bacteriilor și a paraziților cu aciditate rapidă. S-a născut din modificarea culorii Ziehl-Neelsen; Ambele tehnici sunt interpretate în același mod, dar diferă în două elemente: în prepararea reactivului principal și prin faptul că tehnica Kinyoun nu folosește căldură.

Din acest motiv, este cunoscută și sub denumirea de pată rece Ziehl-Neelsen sau Kinyoun modificată la rece. Este indicat pentru colorarea Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium leprae, micobacterii atipice, Nocardias sp, Cryptosporidium parvum, Cryptosporidium meleagridis, Cryptosporidium felis, Cryptosporidium muris Da Cyclosporas cayetanensis.

Cryptosporidium parvum colorat cu colorare Kinyoun. Punlop Anusonpornperm [CC BY 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0)], din Wikimedia Commons

Este demn de remarcat faptul că Nocardia se colorează slab cu această tehnică, deoarece sunt parțial rezistente la alcool și acid, deci pentru acest gen există o modificare a metodologiei.

La rândul său, tehnica Kinyoun rece a fost combinată cu tehnica tricromului modificată de Didier pentru detectarea coccidiei (Cryptosporidium parvum și Isospora belli) și sporii microsporidici (Enterocytozoon bieneusi Da Encefalitozoon intestinal).

Indice articol

  • 1 Justificare
  • 2 Tehnica
    • 2.1 Materiale
    • 2.2 Pregătirea carbol fuchsinului lui Kinyoun
    • 2.3 Pregătirea alcoolului acid
    • 2.4 Pregătirea colorantului de contrast cu albastru de metilen
    • 2.5 Tehnica de colorare Kinyoun
    • 2.6 Tehnica specială Kinyoun pentru Nocardii
    • 2.7 Tehnica combinată a carbol fuchsinei și tricromului modificată de Didier
    • 2.8 Controlul calității
  • 3 Tehnica Kinyoun comparativ cu tehnica Ziehl-Neelsen
  • 4 Referință

Bază

Principalul reactiv de colorare este carbolfuchsin sau carbol fuchsin, care are proprietatea de a se lega de acizii carbolici existenți în peretele celular ceros, bogat în lipide (acizi micolici) ai micobacteriilor și anumiți paraziți..

Această legătură nu este contracarată de înălbitorul acid; prin urmare, microorganismele sunt definite ca rezistente la acid-alcool.

Spre deosebire de tehnica Ziehl-Neelsen-care fixează colorantul prin căldură-, în tehnica Kinyoun acest pas nu este necesar, deoarece soluția de carbol fuchsin preparată pentru această tehnică conține o concentrație mare de fenol..

Fenolul dizolvă materialul lipidic în peretele celular, permițând pătrunderea colorantului carbolfuchsină. După ce vopseaua pătrunde, rămâne fixă ​​în ciuda spălării cu alcool acid.

În acest fel, microorganismele rezistente la acid capătă culoarea roșie caracteristică, în timp ce tot ceea ce nu este alcool rezistent la acid devine decolorat și colorat în albastru..

Tehnică

Materiale

- Carbol fuchsin modificat.

- Alcool-acid.

- Albastru de metil.

Pregătirea lui Kinyoun Carbol Fuchsin

- Fucsină de bază: 4 gr.

- Fenol: 8 ml.

- Alcool (95%): 20 ml.

- Apă distilată: 100 ml.

Fucsina de bază trebuie dizolvată încet în alcool, amestecând constant. Ulterior, fenolul cristalizat este topit într-o baie de apă la 56 ° C. Odată dizolvate, se adaugă 8 ml la soluția de fucsină preparată mai sus.

Prepararea alcoolului acid

- Acid clorhidric concentrat: 3 ml.

- Etanol (95%): 97 ml.

Trebuie măsurat, îmbinat și amestecat.

Pregătirea colorantului de contrast albastru de metilen

- Albastru de metilen: 0,3 g.

- Apă distilată: 100 ml.

Se cântărește și se dizolvă.

Tehnica de colorare Kinyoun

1- Pregătiți un frotiu direct din probă, care poate fi spută, lichid pulmonar, sediment de urină, lichid cefalorahidian sau fecale, printre altele; sau dintr-o suspensie de microorganisme obținute din colonii pure dezvoltate în medii de cultură primare.

2- Fixați frotiul cu căldură.

3- Așezați frotiul pe puntea de colorare și acoperiți-l cu reactivul Kinyoun carbol fuchsin pregătit. Lasă-l să se odihnească 3 sau 5 minute.

4- Se spală cu apă distilată.

5- Se decolorează cu alcool acid timp de 3 minute și se spală din nou cu apă distilată.

6- Se decolorează din nou cu alcool acid timp de 1 sau 2 minute până când nu se mai îndepărtează colorarea.

7- Se spală cu apă distilată și se lasă să se scurgă, așezând lamela în poziție verticală.

8- Acoperiți preparatul cu albastru de metilen și lăsați să acționeze 4 minute.

9- Se spală cu apă distilată și se lasă să se usuce la aer.

10- Examinați la 40X și apoi la 100X.

Dacă doriți să îmbunătățiți și să accelerați colorarea microorganismelor cu aciditate rapidă, adăugați 1 picătură de agent de umectare (cum ar fi Tergitol nr. 7) la 30 sau 40 ml de Kinyoun Carbol Fuchsin.

Unele laboratoare schimbă vopseaua de contrast din albastru de metilen în verde strălucitor sau acid picric; primul conferă o culoare verde fundalului, iar al doilea generează o culoare galbenă.

Tehnică specială Kinyoun pentru Nocardii

Pentru a îmbunătăți colorarea bacteriilor din genul Nocardia, se utilizează o modificare a petei Kinyoun. Tehnica este după cum urmează:

1- Acoperiți frotiul cu Kinyoun carbol fuchsin timp de 3 minute.

2- Se spală cu apă distilată.

3- Decolorați scurt cu alcool acid preparat la 3% până când nu se mai transportă coloranți.

4- Se spală din nou cu apă distilată.

5- Se acoperă preparatul cu albastru de metilen și se lasă 30 de secunde.

6- Se spală cu apă distilată și se lasă să se usuce la aer.

Tehnică combinată de carbol fuchsin și tricrom modificată de Didier

Această tehnică este recomandată pentru analiza probelor de scaun pentru coccidii și spori de Microsporidium sp in acelasi timp. Procedura de urmat este următoarea:

1- Acoperiți frotiul cu Kinyoun carbol fuchsin timp de 10 minute.

2- Îndepărtați colorantul și spălați-l cu apă distilată.

3- Se decolorează 30 de secunde cu alcool acid clorhidric.

4- Se spală din nou cu apă distilată.

5- Acoperiți frotiul cu soluție de tricrom timp de 30 de minute la 37 ° C.

6- Se spală cu apă distilată.

7- Se decolorează 10 secunde cu alcool acid acid.

8- Spălați frotiul timp de 30 de secunde folosind 95% etanol.

QA

Ca un control pozitiv, frotiurile sunt preparate cu tulpini de Mycobacterium tuberculosis și patați cu reactivii preparați pentru a verifica dacă bacteriile iau culoarea adecvată (roșu-fuchsia).

Controalele negative pot fi, de asemenea, utilizate pentru prepararea frotiurilor cu orice tulpină care nu este acidă, verificând astfel că întreaga probă capătă culoarea contrastantă..

Tehnica Kinyoun în comparație cu tehnica Ziehl-Neelsen

Tehnica Kinyoun este mai simplă, deoarece elimină etapa de încălzire, dar principalul său avantaj este că evită emisiile de vapori, foarte toxici și care cauzează cancerul pe termen lung. Prin urmare, pata Kinyoun este mai sigură pentru personalul de colorare..

Este important să se ia în considerare faptul că trebuie avut grijă ca reactivii să nu intre în contact direct cu pielea, deoarece sunt corozivi și înălbitorul este inflamabil..

În ceea ce privește dezavantajele, un frotiu negativ nu indică neapărat că organismul nu este prezent. În plus, prezența resturilor celulare poate duce la fals pozitive, ducând la confuzie în diagnostic..

Referinţă

  1. Chimie Clinică Aplicată. (2016). Kit BK Kinyoun. Disponibil la: cromakit.es
  2. Orozco-Rico Miguel. Pata Kinyoun și două Coccidia în HIV. Medical Journal MD. 2011; 3 (2): 137
  3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A (2009). Diagnosticul microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana S.A.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. (Ed. A 5-a). Argentina, Editorial Panamericana S.A.
  5. Colaboratori Wikipedia. „Pata Kinyoun”. Wikipedia, enciclopedia gratuită. Wikipedia, The Free Encyclopedia, 8 februarie 2018. Web. 5 ianuarie 2019.
  6. Combol A, Fernández N, Figueredo E, Acuña A, Zanetta E. Implementarea unei tehnici de colorare pentru diagnosticul simultan de Coccidia și Microsporidia. Institutul de igienă al Universității Republicii. Montevideo. Uruguay. Disponibil la: hygiene.edu.uy

Nimeni nu a comentat acest articol încă.